[과 수석, 평점 4.5 자료 인증사진 첨부] 단백질 정량법 비교(BCA, Bradford)

소개글

화공생물공학단위조작1 과목에서 A+ 학점을 받은 레포트 입니다.
2-2, 3-1 학기 모두 평균 평점 4.5받은 학생입니다.
레포트를 작성할 때, 참고문헌을 꼼꼼히 다 기록해놓아 참고하시면 큰 도움되실 것이라 생각합니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials & Methods
가. 실험 기구 및 시약
나. 실험 방법

4. Results

5. Discussion

6. Conclusion

7. Reference

본문내용

1. Abstract
Bicinchoninic Acid(BCA)와 Bradford를 이용한 단백질 정량법을 이용하여 미지 시료의 단백질 농도를 측정하고 두 방법의 결과를 비교 분석한다. 또한 미지시료를 분석함에 있어 어떤 방식이 적절한 지 판단한다. 고챁을 통해 해당 실험의 원리와 추가적인 단백질 정량법을 조사해본다.

2. Introduction
가. BCA Assay (bichinchominic acid assay)
1) 원리
단백질이 구리 이온(Cu2+)을 1가 양이온(Cu1+)으로 환원시킬 수 있는 성질을 이용한다. 환원(reduction)된 구리 이온은 Bicinchoninic Acid(BCA) 분자 2개와 반응하여 보랏빛의 착물을 형성하게 된다. 이 화합물은 파장 562nm인 빛 흡수율이 반응 전 BCA나 구리 이온이 담긴 용액에 비해서 높기 때문에 spectrophotometer를 사용해서 흡광도 차이를 측정할 수 있다. 보랏빛 착물이 더 많이 생성되면서 흡광도 값이 커지기 때문에 흡광도 값과 단백질의 양은 비례한다.

2) 장점
- 일반적인 버퍼 물질에 간섭을 덜 받는다.
- 높은 온도에서 한다면 아주 민감하고 빠른 반응을 할 수 있다.
- 계면활성제와 같이 사용할 수 있다.
- 반응 시약이 안정적이다
- 서로 다른 단백질 간의 반응 차이가 거의 없다.
3) 단점
- 실온에서 반응이 완전히 수행되지 않는다. (다량의 단백질을 정량할 때 문제)
- 농축된 단백질 샘플은 희석이 종종 필요하다.
- 단백질의 성질이 바뀐다.

나. Bradford Assay
1) 원리
염색약인 Coomassie brilliant blue dye가 단백질과 결합하면 최대 흡광 파장이 465nm에서 595nm로 바뀌게 되는 성질을 이용하여 595nm에서의 흡광량이 단백질의 농도를 나타내게 되는 방법이다.

참고 자료

박상권 외 7명, 『화공생물단위조작실험1』, 2021-1, P. 52-54 (실험 강의 교재)
Citeqbiologics. ”BCA and Bradford protein assays“.
https://www.citeqbiologics.com/difference-between-bca-bradford-protein-assays/.
accessed 2021년 5월 10일
위키백과. ”Bovine serum albumin“. 2021년 4월 29일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Bovine_serum_albumin.
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위키백과. ”Sodium dodecyl sulfate“. 2021년 4월 27일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Sodium_dodecyl_sulfate.
accessed 2021년 5월 10일
위키백과. ”Beer–Lambert law“. 2021년 4월 20일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Beer%E2%80%93Lambert_law.
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위키백과. ”Absorption spectroscopy“. 2021년 4월 23일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Absorption_spectroscopy.
accessed 2021년 5월 10일
위키백과. ”Biuret test“. 2021년 3월 11일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Biuret_test.
accessed 2021년 5월 10일
위키백과. ”Lowry protein assay“. 2021년 5월 9일.
https://en.wikipedia.org/wiki/Lowry_protein_assay.
accessed 2021년 5월 10일
네이버 지식백과. ”분광 광도계“.
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=269952&cid=42641&categoryId=42641.
accessed 2020년 12월 28일