[유전공학실험] A+레포트 / 전기영동 (Agarose gel electrophoresis and elution) 실험레포트

소개글

"[유전공학실험] A+레포트 / 전기영동 (Agarose gel electrophoresis and elution) 실험레포트"에 대한 내용입니다.

목차

1) 실험 목적

2) 실험 이론
(1) 전기영동
1. 아가로오스 젤 전기영동
2. 다면전기영동
3. 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동
(2) 제한효소
1. 제한효소의 발견
2. 제한효소의 종류
3. 제한효소 지도
4. 다중 클로닝 부위

3) 준비물
① 실험 기기
② 재료 및 시약

4) 실험 방법
(1) Restriction Enzyme digestion
(2) Agarose Gel 만들기 및 Gel electrophoresis
(3) Gel extraction

5) 실험 결과
1. insert DNA와 vector DNA의 전기영동 결과
2. Gel ectraction 후 insert DNA와 vector DNA의 Nanodrop 측정결과

6) 논의 및 고찰
1.실험에서 사용된 BamHⅠ과 XbaⅠ의 특징은 무엇인가?
2. restriction enzyme digestion의 시간을 설정하는 기준은 무엇인가?
3. CIP(Calf-Intestinal Alkaline Phosphatase)의 역할은 무엇인가?
4. TAE buffer는 어떻게 만들 수 있는가?
5. 다음에 제시된 DNA를 전기영동으로 분리해내기 위해서는 몇 %의 아가로오스 젤을 사용해야하는가?
6. 아가로오스 젤 전기영동 시 DNA의 크기가 작아질수록 젤에 나타나는 band의 거리는 로그함수의 역비례 그래프를 따라 증가한다. 이를 그래프를 그려 증명하라.
7. 최적조건이 다른 두 가지의 제한효소를 처리할 때(double digestion), 어떻게 실험을 수행해야하는가?
8. 호환성 점착성 말단이란 무엇인가?
9. BamHⅠ와 호환성 점착성 말단을 형성할 수 있는 DpnⅡ는 어떤 특징을 가지는가?
10. DNA 뉴클레오티드 4종류의 평균 분자량은 얼마인가?
11. 아미노산의 평균 분자량은 얼마인가?
12. 단백질과 DNA 중 분자량이 더 큰 것은 어느 것이고, 얼마나 더 큰가?

본문내용

1) 실험 목적
insert DNA와 vector DNA에 제한효소 처리 후 재조합시키고, 전기영동을 통해 길이를 확인한다.

2) 실험 이론
(1) 전기영동
사진2-1. DNA의 구조
전기영동(electrophoresis)은 전하를 띠고 있는 고분자 물질을 혼합물에서 분리하기 위해 전기장을 띤 망상구조를 가진 젤에서 이동시키는 방법이다. 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법이다. DNA에 있는 인산기(PO4-)에 의해 DNA는 수용액상에서 음전하를 띠고 있기 때문에, 다공성 반 고형상 지지판인 젤 위에 올리고 전기장을 걸어주면 DNA 분자는 지지판 내에서 양극 쪽으로 이동한다. 이 성질을 이용하여 DNA 분자를 크기에 따라 분리할 수 있다.
전기영동을 통해 제한효소로 잘려진 DNA 절편들의 크기를 알 수 있고, 원하는 DNA 절편을 따로 분리하여 사용하거나 제한지도 작성에 편리하게 이용 할 수 있다.

1. 아가로오스 젤 전기영동
사진2-2. 아가로오스 젤 전기영동 원리
아가로오스 젤 전기영동(agarose gel electrophoresis)은 전기영동의 재료로 아가로오스를 사용한다. 우뭇가사리 등의 해초류에서 정제 및 건조한 한천(Agar)은 아가로펙틴과 아가로오스가 주성분인데, 여기에서 아가로펙틴을 제거한 것이 아가로오스이다, 아가로오스를 물에 넣어 끓인 후 굳히면 실험에서 사용할 수 있는 아가로오스 젤이 된다. 아가로오스 젤을 만들고, 크기가 다른 여러 유전체가 혼합된 용액(DNA)은 염색시약과 함께 섞어서 준비해준다. 젤이 완충액에 담겨진 상태로 크기가 다른 여러 DNA가 있는 시료를 홈(well)에 넣고 전장을 걸어주면, –전하를 띠는 DNA 분자는 +극 쪽으로 이동한다.

- 아가로오스 젤 전기영동에 사용되는 재료
① 염색 시약
염색시약(loading dye)으로는 주로 푸른 계열의 브로모페놀 블루(bromophenol blue)와 자일렌 사이아놀(xylene cyanol)을 30% 글리세롤 용액에 녹여서 사용한다.

참고 자료

없음