WST-1 assay / Trypan blue exclusion assay

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목차

1. 개요
2. 실험목적
3. 실험재료 및 방법
4. 실험결과
5. 고찰

본문내용

1. 개요
Cell viability assay란 세포 생존율을 측정하기 위해 진행하는 실험을 의미한다. Cell viability assay에는 많은 방식이 있는데, 그중 실험에 사용한 방식은 WST-1 assay와 Trypan blue exclusion assay이다.
WST-1 assay는 생존 세포의 미토콘드리아에 존재하는 succinate tetrazolium reductase가 WST-1(Water Soluble Tetrazolium salt)를 환원시킬 때 생성되는 formazan이라는 오렌지색 발색 물질의 양을 통해 세포의 생존율을 측정하는 방식이다. 생존 세포가 많을수록 succinate tetrazolium reductase의 활성이 증가하기 때문에 formazan의 오렌지색이 더욱 진하게 발색된다. 이를 spectrophotometer을 이용하여 흡광도를 측정하여 생존 세포 수를 알 수 있다.
이와 같은 방식의 세포 생존율 측정법에는 MTT와 XTT, MTS가 있다.

<중 략>

5. 고찰
WST-1 assay 실험은 이상적인 결과를 얻지 못하였다. 4%와 5%의 blank 평균이 마이너스 값이 나왔는데, 이는 불가능한 값이다. DMSO에 의해 많은 수의 세포가 죽었다 하더라도 그 평균이 음의 값이 나올 수는 없다. WST-1 assay 실험이 제대로 진행되지 않은 여러 요인에 대해 고려해보았는데, EZ-Cytox(WST-1)의 반응을 위해 Incubator에 96well plate를 넣는 과정에서 충격이 가해졌기 때문이라는 가정이 가장 유력하다. 충격으로 인해 plate에 붙어있던 살아있는 세포가 떨어지게 되었을 가능성도 있으며, 이 과정에서 세포가 파괴되었을 수도 있다. 따라서 조작 변인 외의 외부 요인으로 인한 세포 파괴로 실험결과에 영향을 미쳤다고 생각한다.

참고 자료

없음