실험. 유전자 클로닝(Gene cloning)

목차

I. Introduction
1. Molecular cloning
2. DNA restriction enzyme digestion
3. CIAP 처리: 벡터가 재결합하는 Self-ligation 방지

Ⅱ. Materials

Ⅲ. Methods
1. DNA의 제한효소 및 CIAP 처리
2. Transformation

Ⅳ. Results

Ⅴ. Discussion

Ⅵ . References

본문내용

1) insert DNA : Alcohol dehydrogenase(ADH)
Alcohol dehydrogenase(ADH)는 생체 내에서 알코올 대사계에서 가장 중요한 효소이다. 조효소로 NAD+를 이용하여 알코올을 산화시키며 대부분은 활성부위에 구리 이온을 함유하고 있는 metalloprotein이다. ADH는 박테리아로부터 사람에 이르기까지 거의 모든 생물종에 분포되어있으며 기질의 특성에 따라 일차 알코올을 산화하는 secondary-ADH로 나뉜다. 이 둘은 구조적으로 매우 유사함에도 불구하고 활성 부위의 작은 차이로 인해 서로다른 기질특이성을 보인다. 안정성이 우수한 ADH는 음주 운전의 규제, 의료분야, 공업공정 및 식품제조 공정 등에서 요구되는 알코올 측정을 위한 바이오센서와 chiral 알코올을 비롯한 각종 알코올류의 생공업적 생산 등에 이용된다.

2. DNA restriction enzyme digestion
1) 제한효소(Restriction enzyme, endonuclease)란?
: DNA는 특정부위를 자르거나 붙일 수가 있다. 이때 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester bond를 끊어내는 것을 의미한다. 이러한 역할을 하는 효소를 nuclease라 한다. endonuclease의 대표적인 것인 restriction enzyme이다.

2) 제한효소의 기능
: DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포내로 침입해 들어오는 virus와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어 기전

참고 자료

DBpia -재조합 alcohol dehydrogenase의 발현 및 기능분석-공광훈 외 6명 ; 한국분석과학회
https://www.dbpia.co.kr/journal/articleDetail?
nodeId=NODE00635894&language=ko_KR&language=ko_KR
BRIC-실험Q&A DH5α 와 BL21 차이점
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=190632
MCLAB-제품설명 competent cell DH5α, BL21
https://www.mclab.com/BL21-Competent-E-coli.html