예비3 Restriction of DNA 김

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목차

1. 실험 목적

2. 바탕 이론
1) 제한효소

3. 기구 및 시약
1) 실험 기구
2) 실험 시약

4. 실험 방법

5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
본 실험은 대장균의 Plasmide DNA를 서로 다른 3종류의 절단 효소를 활용하여 잘려진 3조간의 DNA를 만들고, 각각에 잘라진 DNA 단편은 Agarose Gel 전기 영도법을 활용하여 절단된 크기를 확인하는 실험이다. 해당 실험 인식부위와 절단 부위가 동일한 Type 2 유형의 제한효소 Nde I, Xho I, EcoR I을 사용한다. 각 제한 효소는 특이 표적에 대하여 절단하여 최종적으로 원형 Plasmid DNA가 3가닥으로 절단된다. 해당 제한 효소들은 DNA를 각도가 있는 특정한 모형인 Sticky end으로 절단하고, 반응이 가장 잘 일어나는 에서 진행된다. DNA Ladder들은 각 홈에서 Loading 후 100V 전압에서 전기 영동을 통하여 최종적으로 3가닥의 DNA 절편의 크기를 파악할 수 있다.

2. 바탕 이론
①제한효소
⑴의미
DNA를 조작하는 과정에서 가장 핵심이 되는 효소는 절단하는 효과를 가지는 제한 효소와 붙여주는 Ligation 효소입니다. 세부적으로 DNA 조작 효소를 살펴보면 DNA 가닥들을 연결하는 리가이제 효소, 핵산 분자를 절단하는 뉴클레아제 효소, DNA 화학 구조를 변경해주는 변형효소가 있다.

참고 자료

2020 생물화학공학 이론 및 실험노트
Willey, Sherwood, Woolverton, 미생물학 제9판, (주)라이프사이언스 p137~172, p358~371
유주현 외 1명, 응용미생물학실험, 도서출판효일, p211~250
오계헌 외 4명, 최신 미생물학 실험 제 2판, 신광문화사 p210~220