형질전환 대장균 선별법, plasmid, 전기영동 조사 내용

목차

1. 형질 전환된 대장균을 선별하는 방법은?
2. plasmid란 무엇인가?
3. 단백질 전기영동과 유전자의 전기영동법의 차이는 무엇인가?

본문내용

1. 형질 전환된 대장균을 선별하는 방법은?
원하는 클론만을 선별하는 과정을 스크리닝(screening) 이라고 한다.

(1) 복제 평판을 이용하는 선별 과정 : 재조합된 벡터 pBR322로 형질전환된 세균의 선별 과정
① 플라스미드를 세균으로부터, 목적 유전자를 특정 세포로부터 분리한다.
② BamHI을 처리하여 pBR322와 목적 유전자를 절단함. pBR322에는 알칼리성 인산가수분해효소를 처리하여 자가 연결 정도를 감소시킨다.
③ pBR322와 목적 유전자를 혼합한 후에 DNA 리가아제를 처리하여 재조합 DNA를 형성한다. 그러나 목적 유전자가 결합되지 않은 자가연결된 플라스미드도 형성된다는 것을 유념해야 한다.
④ 일부의 세균으로 재조합되었거나 그렇지 않은 플라스미드가 도입되나 대부분의 세균은 형질전환되지 않는다.
⑤ 암피실린이 도말된 배지에 세균을 처리한다. 콜로니를 형성한 클론은 pBR322가 도입된 세균임을 의미한다.

참고 자료

THE PEET 생물추론
[네이버 지식백과] 플라스미드 (용어해설)
[네이버 지식백과] 플라스미드 [plasmid] (두산백과)