포항공대 화학생명공학실험[포스텍 A]Pre-Report (Cell Culture)

소개글

포항공대 화학공학과 전공필수 과목인
화학생명공학실험 보고서입니다
PRE-Report 는 실험전 사전지식을 정리하는 보고서이고
Final-Report는 실험후 결과를 정리하는 보고서 입니다.

두가지를 모두 참고하셔서 과제에 도움이 되시길 바랍니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 배경지식
4. 시약 및 기기
5. 실험 순서
6. 주의사항

본문내용

1. 실험 제목
Cell Culture

2. 실험 목적
복제를 완료한 expression vector 가 transformation 되어있는 대장균(BL21)의 세포증식 형태를 시간의 흐름에 따라서 관찰한다. IPTG를 이용해 세포 증식 중 단백질 발현을 induction할 수 있고 원리를 이해한다.

3. 이론 및 배경지식
1) Promoter (T7 promoter)
Promoter란 DNA에 RNA polymerase가 결합하여 transcription을 하는데 필수적인 부분을 말한다. 올바른 promoter가 있어야만 효소가 DNA를 mRNA로 transcription 한다. 따라서 promoter의 선택은 전사 과정과 단백질 발현과정에서 매우 중요하다. 선택의 첫 번째 기준은 promoter의 strength이다. 이 때 strength는 promoter와 효소 사이의 binding affinity를 말하는 것이다. 이 strength는 전사되는 mRNA의 양과 단백질 발현 속도와 직결된다. 일반적으로 strong promoter가 전사량과 발현 속도가 빨라서 선호되지만 오히려 불리한 경우도 있다. 단백질 종류나 단백질 발현 위치에 따라서 최적의 promoter가 정해진다. 두 번째 기준은 promoter의 조절 메커니즘이다. 메커니즘은 constitutive 와 regulatable로 나뉘는데, 전자는 발현이 계속적으로 일어나는 것이고 후자는 발현을 조절할 수 있다. 일반적으로는 regulatable promoter를 훨씬 선호하는데 그 이유는 목적 단백질 발현을 마음대로 조절 할 수 있고 숙주세포에 좀 더 안정한 방법이며 plasmid의 안정성을 높이기 때문이다. Regulatable promoter에는 종류가 2가지 있는데 inducible과 repressible이 있다. Inducible은 꺼져있는 전사과정을 다시 작동하게 만드는 promoter이다. Repressible은 반대의 작용을 한다. 세 번째로 경제성 측면이다.

참고 자료

Sambrook et al, Molecular Cloning 3rd ED, Vol.3, Chapter 15