포항공대 화학생명공학실험[포스텍 A]Pre-Report (Ligation & Transformation )

소개글

포항공대 화학공학과 전공필수 과목인 화학생명공학실험 보고서입니다
PRE-Report 는 실험전 사전지식을 정리하는 보고서이고 Final-Report는 실험후 결과를 정리하는 보고서 입니다.
두가지를 모두 참고하셔서 과제에 도움이 되시길 바랍니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 배경지식
4. 시약 및 기기
5. 실험 순서
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험 제목 : Ligation & Transformation

2. 실험 목적
단백질 발현용 벡터에 TA cloning을 완료한 gene을 ligation을 하여 E.coli 에 transformation한다.

3. 이론 및 배경지식
1) Expression Vector
Expression vector는 단백질을 발현시킬 목적으로 host에 넣는 vector이다. 이전 실험에서는 대량 복제를 하기 위해 cloning vector를 썼다. 두 vector의 첫 번째 차이점은 cloning vector 는 promoter의 부재로 인해 유전자에 RNA 중합 효소가 결합하지 못하여 전사가 불가능하다. 둘째, cloning vector는 결합 부위가 둘 다 염기서열 ‘T’ 로 되어있어서 거꾸로 insert가 들어가는 경우가 있다. 셋째, cloning vector는 유전자 복제에, expression vector는 단백질 발현에 쓰인다. Vector에는 Episcopal or plasmid vector, integrating vector등이 있는데 이 중에서 plasmid vector를 주로 실험실에서 사용된다. Plasmid vector의 큰 장점은 항생제 저항 유전자가 있어 selection하기 매우 유용하다는 것이다. 올바른 단백질 발현 벡터를 고르는 기준은 multiple cloning site 와 promotor가 있어야 한다. 그 이유는 전사와 단백질 발현을 하기 위한 최소 조건이기 때문이다. 또한 원하는 방향으로 DNA 가 삽입되어야 하기 때문이다. Replication origin, growth condition, expressional promotor 등 다양한 조건이 충족

참고 자료

Convergence of Molecular, Modeling, and Systems Approaches for an Understanding of the E.coli Heat Shock Response, Eric Guisbert, Takashi Yura, Virgil A. Rhodius and Carol A. Gross, Microbiol. Mol. Biol , 2008, p. 545-554
Sambrook et al, Molecular Cloning 3rd Ed.,Vol.1, Chapter 1
Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in molecular biology, Vol.1, Unit 1.8
T. A. Brown, Gene cloning(5/e), Chapter 5, p. 87~106