[인천대 생명공학실험3 A+] SDS 젤 제작단백질 정량분석&활성측정 실험결과 보고서 [Glycine과 PI(등전점),Separating gel 및 stacking ge]

소개글

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 [BCA assay를 이용한 eGFP 형광측정]단백질 정량분석&활성측정 실험결과 보고서 입니다.
SDS PAGE, Separating gel 및 stacking gel, 등전점 PI와 pH 관계 및 Glycine의 PI, Polyacrylamide와 agarose, eGFP, 각 시약의 역할 및 Running buffer, TEMED, 등 에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Date
2. Title
3. Purpose
4. Principle
5. Materials & Methods
6. Result
7. Discussion
8. Conclusion
9. Reference

본문내용

3. Purpose
27kDa eGFP에 맞추어 추후 SDS-PAGE 실험에 사용할 SDS 젤(stacking gel 4%, separating gel 12%)을 제작하고 running buffer에 담아 보관하며 실험의 원리를 이해한다.

<중 략>

5. Materials & Methods
Materials
젤 제작 키트, 젤 판, E-tube, Conical tubes(15mL), H2O (3차증류수), 1.5M Tris-HCl, 10%(w/v)SDS, Acrylamide/Bis-acrylamide, 10%(w/v) ammonium persulfate (AP), TEMED, Isopropanol
Methods
젤 제작 키트와 젤 판을 잘 맞춘 뒤 3차증류수를 이용해 누수를 확인함. 만든 separating gel을 4mL, isopropanol 1mL을 넣고 30분간 기다려 굳힘. Isopropanol 제거 후 Stacking gel을 젤판에 간신히 넘치도록 넣은 뒤 comb을 꽂고 30분간 기다림. Running buffer가 담긴 랩에 감싸 보관함. Seperating gel 12%: H2O (3차증류수) 3.2mL, 1.5M Tris-HCl(pH8.8) 2.6mL, 10%(w/v)SDS 100µL, Acrylamide/Bis-acrylamide (30%/0.8% w/v) 4mL, 10%(w/v) AP 100µL, TEMED 10µL를 conical tube에 넣고 vortexing.
Stacking gel 4%: H2O(3차증류수) 2.975mL, 0.5M Tris-HCl(pH6.8) 1.25mL, 10%(w/v)SDS 0.05mL, Acrylamide/Bis-acrylamide(30%/0.8% w/v) 0.67mL, 10%(w/v) AP 5uL을 conical tube에 넣고 vortexing.)

참고 자료

JAMES G. et al., Microbiology a laboratory manual 6th, PEARSON p.215-218, 134-135
Dean R. et al., 생화학 개념과 응용 (2017), 라이프사이언스, p204,205
박영순 et al., (1996) 킴볼생물학 제 6판. p 438,629,644
Purves et al.,(2007) Life: The science of Biology seven edition. Sinauer. p 505