[인천대 생명공학실험2 A+] agar배지 및 Competent cell 제작 실험결과 보고서

소개글

A+를 쉽게 받을 수 있도록 매우 정리가 잘 되어 있는 agar배지 및 Competent cell 제작 실험결과 보고서 입니다.
agar배지, competent cell 원리, Kanamycin(Km),전배양, 얼음통 사용, 50mM, 100mM CaCl2를 이용한 competent cell 제작, glycerol을 이용한 동결건조, competent cell을 agar LB(w/ km, w/o km)배지에 도말하는 이유 등에 대한 이론을 포함하고 있습니다.
이론 외에 실험결과와 오차의 원인까지 포함한 고찰 및 결론 또한 체계적으로 꼼꼼히 적혀있습니다.

목차

1. Abstract
2. Objective
3. Introduction
4. Materials & Methods
5. Results
6. Discussion
7. Conclusion

본문내용

Objective
전 시간에 만든 LB broth에 agar와 kanamycin을 더해 agar LB(w/ km, w/o km) 배지를 만들고
CaCl2용액을 이용해 E.coli competent cell을 제작하며 agar LB(w/o km, w/o km)에 copetent cell을
접종 후 하루 뒤 결과를 확인해 Lb(w/o km, w/o km)와 copetent cell이 잘 제작되었는지 확인한다.

< 중 략 >

Materials
LB medium, kanamycin(100mg/ml stock),agar, autoclave, petri dish, parafilm, 정밀저울, 파이펫,원심
분리기, E.coli, 50mM/100mM CaCl2, Glycerol 용액(50% glycerol,50% LB),Eppendorf tube, agar
plate(w/o km, w/km),네임펜, spreader.

< 중 략 >

Methods
Agar plate 제작: LB(Luria broth) medium 100ml(w/o kanamycin),400ml(w/ kanamycin)가 담긴 2개에 병에 각 LB media의 1.5%인 1.5g, 6g의 agar를 넣고 autoclave한다(121℃,15분). 60℃까지 식힌 후 클린벤치에서 400ml짜리 w/ km배지에 kanamycin(100mg/ml stock)을 400μL을 넣고 잘 섞어준 뒤, w/ o km, w/ km 용액을 페트리 접시에 용액 15ml 이상, 얇게(~5mm) 붓고 각 LB agar가 고체가 될 때까지 식혀준다. 그 후 parafilm을 이용해 페트리 접시를 감싸준 후 4℃에서 뒤집어 보관한다.
Competent cell 제작: 2ml에서 전배양(1:50)한 E.coli를 37℃ 220rpm에서 밤새 키운 후 항생제가 없는 100ml LB배지에 접종한다. A600에서 초기 OD값은 0.2로 37도, 240rmp에서 OD값이 0.6-0.8이 될 때까지 배양한다.

참고 자료

이진성 et al., 배양배지의 이해. 바이오사이언스. p.121, 122, 342-346
Dean R. et al., 생화학 개념과 응용(2017), 라이프사이언스, p204,205