브래드포드 정량법 생화학 레포트

소개글

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목차

1. 제목 (Title)

2. 목적 (Objects)

3. 배경 (background)
1) 완충용액 제조와 아미노산 pH 적정
2) 생장배지 만들기
3) 형질전환
4) 세포파쇄와 단백질 추출
5) 단백질 정량

4. 재료 및 방법 (Materials and Methods)

5. 결과 (Results)
1) 표준곡선
2) 시료의 농도측정

6. 고찰 (Discussion)

본문내용

1. 제목 (Title)
- Project 실험 І
[ E.coli에서 외부 DNA를 넣어주고 단백질을 추출, 분리 후 단백질 정량]

2. 목적 (Objects)
- 완충용액의 특성을 이해하고, 세포의 파쇄방법을 익힌 후, 단백질 정량 방법 과 원리를 이해하고, bradford법을 이용하여 단백질농도를 계산해 볼 수 있 다.

3. 배경 (background)
- 실습1) 완충용액 제조와 아미노산 pH 적정
→ pH는 용액속의 H+ dissociation을 나타내는 데 쓰인다. 이것을 나타내 기 위해 sorencen 은 pH를 log로 pH=-log[H+]로 정의했다.
→ pH 측정방법: 지시약, pH지시종이, pH meter
pH meter : pH meter 표준화를 통해서 전 pH 범위에 걸쳐 제대로 작용하는지 확인.
→ 완충용액: 산이나 염기를 가해도 그 용액의 수소이온 농도(pH)가 크게 변하지 않는 용액으로 약한 산에 대응하는 짝염기를 첨가해 서 제조한다.
→ 아미노산의 적정: 아미노산은 산 또는 염기의 작용에 따라 아미노산의 charge가 변하게 된다. 그러므로 적정곡선의 어느 점에서든 초기의 아 미노산의 양과 첨가한 산 또는 염기의 양을 알면 헨더슨-하셀바흐식을 이용하여 그 적정점에서의 아미노산의 charge를 알 수 있다. pH 변화 에 따라 적정곡선에서 pka와 pI 값을 갖게 된다.
- 실습2) 생장배지 만들기
→ LB broth & Autoclave (LB는 Luria-Bertani의 준말)
: E.coli를 키울 때 사용하는 배지
→ 대장균 - Escherichia coli (E. coli)

참고 자료

한국생화학회 ,1999, 실험생화학, 개정3판, 탐구당, pp.171-184,197-206
부성희 외, 생화학실험, 청문각, pp. 71-79, 95-104
Ninfa, Alexander J (2010) Fundemental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology, wiley pp. 117-118