Genomic DNA analysis from plant cells, Total RNA analysis from various plan organs, 식물의 막 지질의 추출 및 분리

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials and Method
1) DAPI staining
2) Total RNA analysis from various plat organs

4. Data and Result
1) DAPI staining
2) Genomic DNA analysis from plant cells
3) Total RNA analysis from plant organs

5. Discussion

본문내용

Abstract
이번 실험은 총 3주간 진행된 실험이었으며 첫번째 실험에서 애기장대의 잎과 뿌리에 존재하는 DNA를 DAPI로 염색하여 핵을 관찰하고 다른 형광의 빛을 내는 물질을 찾았다. 또한 다양한 조직에서 cell lysis를 한 뒤에 순수한 DNA만을 분리하여 서로 다른 조직에 존재하는 DNA의 양을 housekeeping gene을 이용해 발현량을 확인했다. 두번째 실험에서는 애기장대의 silique, 꽃, 줄기, 잎, 뿌리 조직으로부터 분리한 RNA를 추출하여 이를 각각 비교하여 ribosomal RNA가 가장 많이 발현되는 것을 확인했으며, mRNA를 RT-PCR을 사용해 cDNA로 합성하고 다양한 housekeeping gene을 이용해 각 조직에서 발현되는 양을 비교해봤다. 마지막 주차의 실험에서는 애기장대의 다양한 조직에서 DNA, RNA의 추출법과 다른 방법을 사용하여 순수한 lipid를 추출하였으며 이를 TLC를 사용해 분리시켰으며 PE와 MGDG를 external standard로 하여 분리된 lipid를 서로 비교해 보았다.
Introduction
세포에서 핵을 관찰하기 위해선 핵을 염색하여 관찰해야 한다. 이때 쉽고 간단하게 사용할 수 있는 시약으로는 DAPI (4’,6-diamidino-2-phenylindole)가 있다. 이는 DNA를 염색함으로써 핵, chromatin의 morphology 등을 확인하거나 세포에서 핵으로의 permeability를 light intensity를 통해 비교하는 것에 사용된다. DAPI는 DNA의 minor grove에 있는 adenine과 thymine rich regions에 강하게 결합하는 푸른색의 형광을 띄는 형광 염색약으로 DNA에 특이적으로 결합하는 probe이다. DNA를 염색하기 위해서 세포 내부로 염색약을 침투시켜야 하는데, 이때 DAPI는 쉽게 세포막을 통과할 수 있어 세포가 살아있는 상태 또는 고정된 세포를 염색할 수 있다. DAPI가 DNA와 binding을 하게 되면 이때 358nm 파장에서 최대 흡수를 하며 461nm에서 최대 방출을 하게 되는데 이때 blue-cyan 계통의 형광을 발하게 된다.

참고 자료

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Geoffrey M, Cooper, Robert E Hausman (2016). The Cell: A Molecular Approach. 7th ed. Sunderland, p50~54/ p126~137/ p148 / p573
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