분자생물학실험 (분생실) Plasmid Preparation (Mini-prep) 레포트 입니다.
- 최초 등록일
- 2019.08.11
- 최종 저작일
- 2019.04
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소개글
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목차
(1) 서론
1) 실험날짜(Date)
2) 실험목적(Purpose)
3) 이론적배경(Principle)
(2) 재료 및 방법
1) 실험재료(Materials)
2) 실험방법(Method)
(3) 실험결과(Result)
(4) 논의(Discussion)
본문내용
2) 실험 목적 (Purpose)
- DNA minipreparation의 정의와 방법에 대하여 알아본다.
- Transformat (E. coli)로부터 Plasmid를 분리한다.
3) 이론적 배경(Principle)
- 정의 ; Plasmid preparation은 plasmid DNA의 순수분리를 위한 방법으로, bacterial culture와 그에 상응하는 plasmid DNA의 양에 따라서 mini-preparation, midipreparation, maxipreparation 등으로 분류한다. 우리가 실험한 mini-preparation은 50~100ug의 DNA를 얻는데 사용하는 방법이다.
- Miniprep – alkaline lysis
가. 대부분의 plasmid DNA 분리 protocol은 plasmid DNA가 가지는 두 가지 특징에 착안하여 설계 되었다.
1. Plasmid는 supercoiled circular DNA이다.
2. Plasmid는 chromosome 보다 size가 작다.
나. pH 12.0~12.5의 alkaline condition을 거친 linear DNA는 denaturation 되지만 circular DNA는 그렇지 않다는 점을 이용한 방법을 alkaline lysis 혹은 alkaline extration이라고 한다.
- Alkaline lysis 시약&시료의 역할 및 원리
가. LB broth ; bacteria를 배양하기 위해 사용되는 액체 배지이다.
나. Solution 1 ; glucose + EDTA + Tris-Cl(pH8.0) + lysozyme
1. EDTA(Ethylenedinitrilo Tetra-acetic Acid) ; EDTA는 cell wall의 2가양이온(Ca2+)과 결합하여 cell wall을 약화시킨다. 또한 lysis 이후에 bacterial nuclease의 cofactor인 Mg2+와 결합하여 DNA의 degradation을 막는다.
참고 자료
Asubel, Fredirick M / Current Protocols In Molecular Biology / Wiley / 2003 / pp75-84
Das, Surajit, and Dash / Microbial Biotechnology – a Laboratory Manual for Bacterial Systems / SpringerVerlag / 2015 / pp28-33
CARSON, Susan / Molecular Biology Techniques pbk / Elsevier / 2012 / pp38-39
