연세대 공학기초설계 폴리머 Bradford 법 이용한 정량분석

목차

1. 실험의 목적

2. 실험의 이론 및 원리
1) 단백질 분석법
2) 단백질 BSA (Bovine Serum Albumin)
3) 측정원리 - Beer-Lambert Law

3. 실험 준비물

4. 실험 과정

5. 주의사항

6. 실험 결과

7. 결과 분석 및 고찰
(1) 주어진 sample 안에 포함되어 있는 단백질의 농도를 구하여라.
(2) 방향족아미노산의 흡광도로 잰 농도와 Bradford 방법으로 잰 샘플의 농도의 값을 비교하여 보아라.
(3) Bradford 분석법이 가지는 장점과 단점에 대하여 조사하여라.

8. 참고 문헌

본문내용

1. 실험의 목적
표준 단백질 용액(standard protein solution)을 이용하여 단백질 농도 검량선을 작성하고 미지 시료의 단백질 농도를 측정한다.

2. 실험의 이론 및 원리
< 단백질 분석법 >
① 단백질의 흡광도를 직접 측정하는 UV법
- UV법은 단백질에 포함되어 있는 tryptophan, tyrosine, phenylalanine이 가지는 흡수를 280nm에서 정량하는 방법이다. 이 방법은 간단, 신속 또는 저단백질 농도로서 정량할 수 있고, 시료를 회수하여 얻을 수 있는 장점이 있다. 그러나 단백질의 종류에 따라서 아미노산의 함량이 뚜렷이 다른 것 및 pH 변화에 따라 다른 흡광도를 나타내는 단점이 있다. 또한 단백질과 비슷한 흡수 파장을 가지는 물질, 특히 핵산(nuclear acid) 이 섞여 있는 시료의 경우에는 신뢰도가 떨어진다.

② 단백질-의존(protein-dependent) 색 변화에 따른 흡광도를 측정하는 방법
1. Lowry 법
- 단백질의 정량반응의 일종으로 알칼리성 구리염에 의한 Biuret 반응과 Folin 시약에 의한 페놀기의 반응을 조합시켜 감도를 현저하게 향상시킨 방법이다. 시료용액에 알칼리성 구리염과 Folin 시약을 가하여 가열 반응시켜 750nm의 흡수를 측정한다. 미량의 단백질(5~100 μg/ml)의 정량에 적절한 방법이다.

2. Smith copper/bicinchoninic 법
- 단백질 중 tryptophan과 tyrosine에 의해 가 로 환원되는 것을 이용한 방법이다. 정확도가 높지만 분석에 필요한 시약의 종류가 많고, 이러한 시약들은 분석 동안에 정확하게 섞이고 정량되어야 하는 불편함이 있다.

3. Bradford 법
- 산성용액에서 coomassie brilliant blue 염료는 단백질의 염기성 아미노산 및 방향족 아미노산의 측쇄(side chain)와 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도..

<중 략>

참고 자료

연세대학교 신소재공학과 공학기초설계 실험교재 p.88~93
식품과학기술대사전, 한국식품과학회, 2008. 4. 10. 광일문화사
https://en.wikipedia.org/wiki/Bradford_protein_assay