생명공학실험. Protein Extraction단백질추출, Hydrogel Encapsulation, BCA assay

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. Conclusion
7. References

본문내용

Abstract
BCA assay를 이용해 단백질을 정량 하였다. BCA단백질은 단백질의 펩티드 결합을 이용한 정량 방법으로 세포 파쇄를 통해 나온 단백질을 정량 하였다. 세포 파쇄에는 RIPA buffer, Freeze & thaw, 피펫팅을 이용하였으며, 각각 1059.8518ug, 692.0740ug, 382.8148ug가 추출됐다. 가장 효과적인 방법은 RIPA buffer였고 피펫팅을 이용한 방법은 효과적이지 않았다. 또한 Hydrogel을 이용하여, 단백질을 가둬 시간에 따른 단백질의 방출량을 측정하였다. 첫 5분간은 195.6667ug의 방출량을 보였으며 10분, 15분, 20분 단백질의 방출량이 미미했으며, 비슷한 수준으로 방출되었다.

Introduction
Protein Quantification: BCA Assay
BCA assay는 Bicinchoninic acid에서 나온 말이며, Pierce방식이라고도 한다. 단백질이 구리 이온(Cu2+ -> Cu1+)을 환원시킬 수 있는 성질을 이용하여 단백질을 정량 할 수 있다. 1단계에서 단백질의 펩티드 결합이 Cu2+을 환원시켜 Cu1+를 만든다. 2단계에서 Cu1+ 와 2분자의 BCA가 복합체를 이뤄 보라색을 보인다. 즉 단백질에 의해 환원된 구리 이온은 BCA용액과 반응을 해서 보라 빛의 화합물을 생성하는 원리를 이용한다. 이 화합물은 빛의 특정 영역(562nm)에서 구리 이온이 담긴 용액과 BCA용액 각각보다 빛의 흡수율이 높기에, spectrophotometer를 사용해서 측정하면 흡수율 차이를 측정할 수 있다. 단백질의 양이 많으면 보다 많은 보랏빛 화합물이 생성되고 그 화합물은 빛을 더 많이 흡수한다 즉 흡수율이 증가할수록 Sample에 있는 단백질 양이 증가한다. 하지만 단백질 농도에 따른 흡수율에 대한 데이터(표준곡선)가 있어야 그 결과가 의미를 가진다.

참고 자료

Madian et al, 오계현, 『핵심미생물학』, 바이오사이언스출판, 2013, P41~50/ 122~123
Campbell et al, 전상학, 『캠벨 생명과학10판』, 바이오사이언스출판, 2016, p379~403/ 432~456