[실험 프로토콜]CaCl2를 이용하여 competent cell 만드는 방법

소개글

heat shock 형질전환에 사용할 competent cell을 cacl2를 이용하여 만드는 방법입니다.
그림으로 간단하지만 자세히 설명했습니다. 직접 실험하는 방법 그대로 그림을 그렸기에 그대로 따라하시면 될 것 같습니다.

목차

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본문내용

1. Colony 하나를 LB broth 3ml에 접종한 후 37℃ incubator에서 밤새 키움. (seed culture)
2. 위에서 키운 배양액 500ul을 LB broth 50ml이 담긴 500ml 삼각플라스크에 넣음.
3. O.D600에서 0.4가 될 때까지(약 2시간 정도) 37℃ shaking incubator에서 키움. (1% 접종원, main culture)
- O.D600 : 0.4~0.6이 좋은 상태 (E.coli마다 다름).
- LB broth는 데워서 사용.
4. 배양액 20-30ml을 50ml 원심분리용 tube에 넣고 4℃에서 4000rpm(or 6000rpm(6K), rotor #7)으로 10분간 centrifuge.
5. 상층액을 pipette으로 완전히 제거하고 세포를 취함.
6. 미리 차게 해둔 100mM CaCl₂ 25ml을 넣고 부유시킴.
7. 얼음에 20분 놓아둠.
- 이때부터 매우 조심해서 함. (CaCl₂가 들어갈 때부터는 조심해야 함.)
8. 4℃ 4000rpm으로 10분간 원심분리.
9. 상층액을 버리고 100mM CaCl₂ 2ml으로 재현탁.

참고 자료

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