2- Restriction Enzyme Digestion 실험레포트(보고서)

목차

없음

본문내용

Material
-절단하고자 하는 DNA (~1ug)  : 3ul
-10x 반응완충용액   :   1ul
-제한효소 (10 units/μl)  :  1ul
-증류수  :   5ul
-total    10ul  

Method
1. DNA와 buffer, dH2O를 먼저 섞고 마지막에 제한효소를 넣는다.
2. 기포가 생기지 않게 주의하면서 섞는다.
3. 약 3~5초간 briefly centrifuge하여 반응할 재료들이 바닥에 모이도록 한다.
4. 37℃에서 적당 시간 반응시켜 DNA가 충분히 절단되도록 한다.
대개 1~2 시간 반응시킨다. (온도는 효소의 종류에 따라 달라질 수 있다.)
5. agarose gel 전기영동을 시행하여 반응을 확인한다.

* 위와 같은 혼합물을 시험관에 넣을 때에는 보통 효소를 가장 마지막에 넣는 것이 좋다.
* 효소는 -20°C에서 50% glycerol이 들어있는 완충액내에서 안정하게 존재하므로 반드시 냉동실에 보관하고 실온에 노출되는 시간을 가능한 한 줄인다.

참고 자료

http://blog.naver.com/hongmsoo?Redirect=Log&logNo=150016260288
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=withcoffee67&logNo=70155805229
http://en.wikipedia.org/wiki/EcoRV
http://xerxgus.blog.me/70019747092