베타갈락토스데이즈 활성

목차

1. Subject
2. Object
3. Principle
4. Material
5. Method
6. RESULT
7. DISCUSSION & CONCLUSION
8. Reference

본문내용

1.Subject
β-galactosidase의 활성.

2.Object
이온교환 크로마토그래피를 통해 β-galactosidase를 분리하고 protein의 활성을 측정한다.

3.Principle
◆ 이온교환 크로마토그래피
Ion-exchange chromatography를 통해 β-galactosidase를 분리를 한다. 일반적으로 사용되는 이온교환 수지의 충진제로는 SP Sephadex C-50를 이용하는데 이것은 강한 cation 교환제로 작용한다. 일반적으로 단백질은 구성 아미노산 중에 산성, 염기성 아미노산을 함유하므로 적당한 pH 조건하에서는 양(+)또는 음 (-)의 전하를 가지고 있기 때문에 관에 전해질의 고분자 물질인 SP Sephadex C-50를 충진제로 넣고 각종 단백질의 전하량과 충진제의 이온 상호작용의 차이에 따라 단백질을 분획하였다. Chromatography resin인 세파덱스(Sephadex)에 Sulfopropyl 기를 가지며 구조는 다음과 같다.

세파덱스는 단백질 분리에 자주 사용되는 겔로 다당류이고 큰 고분자 사슬에 있는 수산기 때문에, 매우 극성이며 많은 물을 흡수한다. 겔은 그들이 물을 재흡수하여 팽윤하는 능력에 따라서 특성을 나타낸다. 세파덱스 유형의 번호는 물의 재흡수 값에 관계된 것이다. 일반적으로 Sephadex겔은 물에 녹지 않으며 약한 산화제, 환원제, 약한 염기에 대해서 안정한 특징을 가진다.

◆ 세파덱스 수지(resin)
유기물질의 작은 무정형(비결정성) 입자이다. 복잡한 유기산 및 그 유도체로 이루어진 고체 또는 반고체이다. (위의 그림과 같은 구조로 존재)
Sulfopropyl는 음전하를 가져 양이온을 흡착하는 고분자 담체가 cation exchanger, 양이온을 가져 음이온을 흡착하는 고분자 담체가 anion exchanger로 작용하며 이온교환체를 column을 채우면 서로 반대하전을 가지는 단백질로 이동이 정지되어 결합한다. 단백질의 기질간의 화합정도는 pH와 관을 흐르는 용액의 이온의 강도에 의해 좌우되며, 효과적인 분리를 위하여 이런 조건을 다양하게 조절 한다.

참고 자료

단백질실험노트(상), 김승호, 월드사이언스 p.7~24, 135~140
식품분석, 조득문, 효일, p.50-59
탄수화물 효소반응, 이대실, 한림원, p.107-114
분자생물학, 안정선, 월드사이언스, p.719~720
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http://www.flemingtonlab.com/Protocols/TotalRNAprep.pdf
http://www.takara.co.kr/pds/magazine/pdf/20/h_1.pdf