PCR, 유전자 클로닝(molecular cloning)

목차

1. Introduction
A. PCR (polymerase chain reaction)
B. Molecular cloning

2. Material
A. PCR
B. Molecular cloning

3. Method
A. PCR
B. Molecular cloning

4. Result
A. PCR
B. Molecular cloning

5. Discussion
A. PCR
B. Molecular cloning

6. Further study
A. PCR
B. Molecular cloning

7. Reference

본문내용

1. Introduction
A. PCR (polymerase chain reaction)
i.분자생물학에서 사용하는 생화학적 방법으로, 특정 DNA sequence를 증폭시킨다. Kary Mullis에 의해 1983년에 개발되었고 생물학적 리서치에서 널리 쓰이고 있다.
ii. Heating과 cooling 반응이 반복되는 사이클을 통해 DNA melting과 enzymatic replication을 반복한다. DNA melting이란 높은 온도로 인해 DNA의 이중나선 구조가 깨져서 두 가닥으로 분리되는 것을 의미한다. Taq polymerase를 쓴다. Taq polymerase는 열에 의해 변성되지 않으며 Thermus aquaticus라는 박테리아로부터 분리되었다. DNA polymerase는 single strand DNA를 주형으로 사용해 nucleotides를 primer 뒤쪽에 붙여준다.
iii. Primers(short DNA fragments) : 증폭을 원하는 DNA sequence에 대해 상보적인 부분을 가지고 있다. 선택적인 증폭에 중요하다.
iv. PCR이 진행될수록 만들어진 DNA는 다시 증폭시킬 때 주형으로 쓰인다. DNA template는 지수함수적으로 증폭된다.
v. PCR purification : PCR purification kit를 사용했다. PCR product를 전기영동으로 확인하기 전에 불순물(dNTPs, enzymes 등)을 제거한다.
B. Molecular cloning
i. Cloning 은 gene 전체를 포함하는 DNA fragments를 증폭한다. Promoters, non-coding sequences, randomly fragmented DNA와 같은 DNA sequence를 증폭시킬 수도 있다. Cloning을 통해 genetic finger-printing을 하거나 단백질을 대량으로 생산할 수 있다.

참고 자료

http://www.bioneer.co.kr/products/DNARNAPrep/PCRPurificationKit-overview.aspx
http://en.wikipedia.org/wiki/Sanger_sequencing
http://bioweb.uwlax.edu/genweb/molecular/seq_anal/primer_design/primer_design.htm
http://en.wikipedia.org/wiki/Polymerase_chain_reaction
http://en.wikipedia.org/wiki/Transformation_(genetics)