단백질 등전점&정량법

소개글

생화학 실험 레포트 입니다 ^^

목차

Ⅰ. 단백질의 정량법
1. Biuret test
2. Lowry 실험
3. 닌히드린 실험
4. Bradford법
II . 등전점

◦ 아미노산의 산·염기 특성
III . 염에 의한 침전

본문내용

모든 종류의 단백질의 농도를 결정할 수 있는 완벽한 방법은 지금까지 알려져 있지 않았다. 따라서 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도, 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다. 단백질을 정량하는 방법에는 여러 가지가 있다. 이는 단백질의 종류와 성질에 따라서 정량하는 방법이 다른데 일반적으로 아미노산의 일반 정량법으로서는 아미노산의 아미노기 혹은 카르복실기를 정량하는 방법과 아미노산의 정색반응을 이용하는 방법이 있다.
1. Biuret test
① 원 리
두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 배위 화합물이 형성됨으로써 생기는 것으로 생각되고 있다. 이 실험은 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋으나 비교적 많은 양의 단백질을 정량하는 데 쓰인다.
② 시약 및 기재
가. 단백질 표준용액 - 소의 혈청 알부민 3.0mg/ml
나. 뷰렛 시약
- CuSO4․5H2O 3g, 타르타르산나트륨칼륨 9g를 500ml의 0.2N NaOH 용액에 용해시키 고, 이에 KI 5g를 추가한 후 0.2N NaOH 용액을 가하여 1L로 만든다.
다. 미지 시료용액
라. 분광 광도계
③ 실험방법
시험관(18*150nm) 8개에 각각 단백질 표준용액, 미지 시료용액 및 물을 다음과 같이 취한다.

참고 자료

식품화학, , 김동열, 1988, p637~640
식품분석학, 지구문화사, 채수규 외, 2003, p295~298
화학대사전, 신일상사, 김창홍 외, 2001, p340~341, p500~501
분석화학, 자유아카데미, 김강진 외, 1993, p144~145