[일반생물학실험] Transformation, Restriction enzyme 그리고 PCR

소개글

현대 생명공학에 있어서 DNA에 관한 연구는 가히 필수적이며 우리는 이번 실험을 통하여 그 기초기술을 익힐 수 있다.

목차

I. 서론

II. 재료 및 방법
1) Bacterial Transformaiton
2) Plasmid Isolation
3) DNA Extracion Method from Blood Using FTA Card
4) PCR
5) 전기영동

III. 결과 및 분석

IV. 결론 및 제언

V. 참고문헌

본문내용

I. 서론

이번 실험에서는 E.Coli의 bacterial plasmid를 대상으로 transformation하여 그 결과를 확인하고 특정한 plasmid isolation을 실험하였다. 또한, 연구자의 혈액을 추출하여 DNA extraction 하고 PCR(Polymerase Chain Reaction)로 증폭시킨 후 특정한 유전자를 확인하는 과정을 거쳤다. 최근 분자생물학이 발달함에 따라 초파리, 침팬지, 인간 등의 게놈프로젝트가 진행되고 있고, 생명과학은 유전자의 발현기작을 규명하는 수준에 이르렀다. 이에 따라 유전물질인 DNA와 RNA 공학 연구는 더욱 활발해지고 있으며 여러 가지 치료가 어려웠던 질병들의 치료법들이 속속들이 개발되고 있다. 즉, 현대 생명공학에 있어서 DNA에 관한 연구는 가히 필수적이며 우리는 이번 실험을 통하여 그 기초기술을 익힐 수 있었다.


II. 재료 및 방법

1. Bacterial transformation
지난 ligation 실험의 결과인 ligated plasmid를 각각 ligation 그룹에는 10 μl, control 그룹에는 2 - 3 μl를 넣고 100 μl의 얼린 competent cell(E.Coli)을 슬러지 상태로 혼합하고 15 분 간 얼음 속에 보관한다. 42 ℃로 맞춘 물이 담긴 수조에 튜브를 정확히 90 초간 담궈 E.Coli 표면에서 내부로 plasmid가 삽입되도록 한다. 이후 튜브를 얼음 속에 2 - 3 분 동안 얼음 속에 둔다. 각 그룹별로 400 μl와 800 μl의 LB medium첨가한 후 37℃에서 40 분 간 배양한다. 그리고 다시 4개의 군1)으로 나누어 각각 100 μl씩 접종한다.

2. Plasmid isolation
실험에서 사용한 균주는 PUC19 HV1이며 배양된 것을 1.5 ml 씩 두 개의 튜브에 나누고 10,000 g에서 2 분간 원심분리 시킨다. 상층액을 따라내고 매우 차가운 solution 12)을 250 μl 첨가하고 덩어리를 다시 분산시킨다. 250 μl의 solution 23)를 가하고 실온에서 5 분 간 배양한다. 350 μl의 매우 차가운 solution 34)을 가하고

참고 자료

Purves ․ Sadava ․ Orlans ․ Heller, Life The Science of Biology, 2003, W.H.Freeman and Company

Campbell ․ Reece ․ Taylor ․ Simon, Biology Concepts & Connections, 2006, Benjamin Cummings