Protein extraction(E.coli), Coomassie stainig

소개글

본 실험에서는 GST-bead를 이용하여 특정단백질 추출해 보았다

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Result
4. Discussion
5. Note
reference는 각주에..

본문내용

1. Introduction
본 실험에서는 GST-bead를 이용하여 특정단백질 추출해 보았다.
E.coli에서 어떻게 FAF1이라는 단백질을 추출할 수 있을까? “PGEX 4T-1”이라는 protein을 뽑기 좋은 벡터가 있는데, 이것은 GST를 만든다. GST-bead는 FAF1에 특이적으로 붙는 성질이 있다. 이 성질을 이용하여, E.coli에 벡터(PGEX 4T-1)를 넣어주면 벡터는 GST를 E.coli내에서 만들 것이다. 그렇게 되면 GST-FAF1을 형성하게 되고, 우리는 원하는 단백질인 FAF1을 찾을 수 있는 것이다.
‘전기영동‘은 단백질의 크기차이를 이용하여 크기별로 구별하는 방법이다. 단백질을 전기영동 할 때에는 단백질을 자르지 않고 단백질에 구조적인 변형만 일으켜서 전기영동 한다. 이것을 SDS-PAGE라고 하는데, 접힘구조를 SDS처리하여 linear(직선구조)한 형태로 만드는 것을 의미하다. 그렇게 되면 좀 더 정확하게 크기별로 구별할 수 있기 때문이다.
이와 같이 전기영동의 목적이 단백질의 크기를 알아보기 위한 것도 있으나, 서로 다른 샘플을 gel상에 로딩하여 그 패턴을 보고 비교하여 서로 다른 것인지 확인하기 위한 목적도 있다. 정리하자면, 단백질 전기영동의 목적은 단백질의 크기를 알아보는 것이고, 세포적 특성이 결정되는 원리를 이해하며, 여러 샘플이 있을 시에 그 샘플들을 구별하기 위함이다.
SDS PAGE를 이용한 전기영동에 대해서는 Note에서 알아보도록 하자.

2. Materials & Methods
<재료>
- cloning된 E.coli, GST lysis buffer, TB broth, GST-bead, SDS PAGE gel, coomassie brilliant blue sloution
- 그 밖에 실험에 기본적으로 필요한 기구들..

참고 자료

각주에 있음