[생화학실험] Peptide Mass Fingerprinting I (In-Gel Proteolytic Digestion)

소개글

저희 학교 조교의 주문대로 Discussion에 중점을 두며 열심히 썼습니다. (고찰 - 한 장 분량, 글자 point ; 10)
A+ 받은 보고서이니 참고하시면 도움 되실 겁니다~

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시료 및 기자재
7. 실험방법
8. 고찰
9. 참고문헌

본문내용

* Peptide Mass Fingerprinting
1) Sample preparation
시료를 녹이는 것은 proteomics에 있어서의 첫 단계로서 재현성 있고, 의미있는 결과를 얻는데 있어서 가장 중요한 단계중의 하나이다. 단백질 시료 형태와 기관이 다양하기 때문에 이에 따른 최적의 시료 준비과정을 경험적으로 결정해야 한다. 이상적으로, 이 과정은 시료에서 단백질의 완전한 용액(solubilization), 성분분해(disaggregation), 변성(denaturation)과 환원(reduction)에 따른다.

① 순서
- 가능한 한 단백질의 손실을 막을 수 있도록 간단하게 처리한다.
- 세포나 조직을 녹일 때에 단백질 분해와 퇴화를 최소화 하여야 하는데, 온도는 가능한 한 낮게 하고, protease 저해제를 포함한 용액 변성용액에 직접적으로 세포분열을 하게 해야 한다.
- 시료준비용액은 얼려진 상태로 저장되고 준비되어야 한다.
- 고순도나 이온화 되지 않은 urea를 사용한다
- 초원심분리에 의해 모든 미립자 물질을 제거한다. 고형입자나 지방은 gel구멍에 막혀서 제거된다.
- 단백질의 변형을 피해야 한다. urea를 첨가한 후에 시료에 열을 가해서는 안 된다. urea를 첨가할 때 37℃이상을 유지하면 안 된다. 온도가 올라가면 urea가 가수분해해서 isocyanate가 된다.

(중략)

8. 고찰
이번 실험은 protein mixture로부터 SDS-PAGE을 이용해 분리한 미지의 단백질 시료를 분석하기 위한 준비 단계로서 gel에 있는 단백질 시료를 denaturation 및 digestion 하는 실험이었다. 미지의 단백질의 정체를 파악하는 것은 프로테오믹스(proteomics)을 비롯한 단백질 연구의 기초가 된다. (중략)

참고 자료

없음