일반생물학실험 Bradford Assay (브래드포드 단백질 추출법)

소개글

A+받은 Bradford Assay를 이용한 단백질 추출에 관한 일반생물학 실험보고서입니다.

목차

1. 서론(Introduction)

2. 재료 및 방법(Materials & Method)

3. 결과(Result)

4. 고찰(Discussion)

5. 참고문헌(Reference)

본문내용

단백질은 유전자의 발현을 통해 만들어지는 것으로서, 그 종류와 기능은 매우 다양하다. 인간의 염기서열을 모두 안다고 해서 그 산물인 단백질을 모두 이해할 수는 없는데, 전사, 해독되는 동안 발현이 조절된다고 하더라도 최종적으로 세포 내에서 기능을 하는지, 한다면 어떤 기능인지는 단백질 합성 후 얼마나 정교하고 적절하게 변형되는가에 달려있기 때문이다. 그래서 생명체의 전체 유전자인 게놈에 의해 발현되는 모든 단백질의 총합인 proteome을 다루고 이들을 대량으로 분석하고 상호기능관계 지도를 작성하며, 구조분석을 통해 궁극적으로 특정 단백질과 이를 만드는 유전자의 기능을 동시에 밝혀내는 proteomics(단백질체학) 분야의 연구가 활발히 진행되고 있다.

생명체로부터 단백질을 정량하여 분석하는 것이 단백질체학의 기초가 되므로, 이번 실험에서는 여러 가지 단백질 정량 방법 중 하나를 수행해볼 것이다. 단백질을 정량하는 방법에는 4가지의 분광학적 방법이 이용된다. 이들은 단백질의 자외선흡수에 따라 그 양을 알아볼 수 있는 것으로 Bradford assay, the Lowry assay, the Smith copper/bichinchoninic assay 네 가지 방법이 주로 이용되는데, 여기서는 Bradford assay에 대하여 알아보기로 한다. 이 정량법은 Bradford dye assay라고도 불리며, 산성용액에서 CoomassieⓇ Brilliant Blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대흡광도는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 된다. 이 방법은 발색 반응이 2분 이내에 완결 되며, 1시간까지 안정성이 유지된다. 미량 정량법을 사용하면 1-200mg의 단백질을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다. 방해성분으로 알려진 것으로는 Triton X-100과 황산도데실나트륨(SDS)이 있다.


Materials & Method

Standard curve를 그리기 위해, Bovine Serum Albumin (BSA) 용액을 각각 0, 1, 3, 5, 7, 9㎍/㎖ 농도로 800㎕씩 준비한다. Bradford 용액을 200㎕씩 넣어 각각의 시료가 1㎖가 되도록 한 뒤, Spectrophotometer를 이용해 흡광도를 3번 측정한다

참고 자료

D. R. Caprette, http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/protein/bradford.html, 24 May 1995