[생물실험] Western blot 실험서 (실험과정만 상세히)

소개글

실험실 생활을 하며 정리해본 western blot에 관한 내용입니다.

목차

없음

본문내용

1. Comb을 제거하고, SDS-PAGE running box를 조립한다.
2. 10 x Electro buffer를 dilution 하여 850ml을 만든다.
3. 1 x Electro buffer를 SDS-PAGE running box 가운데부터 부어준다. 요때, protein sample들을 꺼내어서 상온에서 녹인다. (voltexing)
4. 녹인 Protein sample들을 Comb이 있었던 자리에 정량대로 넣는다.
5. Loading (10㎕씩) 한 다음 Protein size marker들을 5㎕ 넣어준다. (5㎕면 충분하다)
6. 50mA, 400V setting 한 후, running. (시간 날 때마다 체크~!)
7. Membrane을 8(가로-두루마리를 피는 방향의 길이) x 6cm로 자른다.
8. SDS-PAGE electrode가 거의 끝날 무렵, Membrane을 100% 메탄올 (25ml) 에 5분간 담가 놓는다.
9. 1x Transfer buffer (225ml- KIT 1개당) 를 8번 step의 메탄올이 담겨있는 플라스틱에 담는다. (찰랑찰랑 할 정도가 된다. 절대 넘치지 않는다~!!)
10. Form pad를 3혹은 5장씩 겹쳐서 미리 준비해 놓는다. (보통 5장씩 x2 사 용)

참고 자료

단백질 실험 노트 / 역자 김승호, 장규태 (월드사이언스)