[일반생물학실험] PCR & Molecular Cloning

소개글

gene cloning 실험인 PCR & Molecular Cloning에 대한 실험레포트입니다.
실험에 대해 요약 정리한 레포트입니다.

목차

1. 실험 이론 및 원리
2. 실험 결과
3. 토의 사항

본문내용

1. 실험 이론 및 원리
1.1. PCR
1.1.1. Primer design 원리
목표로 하는 DNA 시퀀스의 시작과 끝부분에 상보적으로 결합해서 DNA 중합효소가 DNA 중합을 시작할 수 있도록 '시발체' 역할을 해주는 짧은 다염기체이다. DNA 복제에 primer가 필요한 이유는 과정을 촉매하는 효소인 DNA중합효소가 이미 존재하는 유전자 가닥에 새로운 nucleotide를 붙이는 역할만 할 수 있기 때문이다. DNA중합효소는 primer의 3'end에서 시작하여 반대편 가락을 복제한다. 목표 시퀀스에 상보적인 아무 염기서열이나 마구잡이로 정해서 primer를 만드는 게 아니라 이 primer의 염기 구성이 어떠냐에 따라서 PCR의 효율이 큰 영향을 받기 때문에 최적의 primer를 만들기 위해서는 갖춰야 할 조건들이 있다. 먼저 길이는 20～30bp 정도여야 한다. primer에 따라서 Annealing 온도가 변화하기 때문에 G, C의 양을 고려하여 G+C%가 50～60%로 구성하고 purine과 pyrimidine 염기의 연속적인 배열을 피해야 하며, 한 쌍의 primer가 부분적으로 서로 상보적이지 말아야 한다. 그리고 primer의 3‘말단에 G나 C가 3개 이상 연속적으로 오지 않도록 하여 hair pin loop 형성을 피해야 한다. 마지막으로 값이 60～70℃ 여야 하고 값이 동일한 두 primer를 설계해야한다.
1.1.2. 결과에 target size 외에 다른 band가 보인다면 개선해야 할 방향은?
primer가 붙어야 할 곳에만 붙지 않고 여기저기 붙었기 때문이다. 그러므로 값을 높여주면 개선될 것이다.
1.1.3. Target DNA fragment가 증폭되지 않았다면 개선해야 할 방향?
Targer DNA fragment가 증폭되지 않은 이유는 primer가 제대로 targer DNA fragment에 부착되지 않았기 때문이다. primer가 잘 붙도록 값을 낮춰 준다.

참고 자료

없음