[분자유전학] Transformation (형질전환)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
형질전환은 세균들이 주변환경으로부터 DNA 분자를 받아들이는 과정을 의미한다. 형질전환된 세균을 형질전환체라 부른다. 형질전환은 접합에서와 같이 세포와 세포 사이의 접촉이나 박테리오파지와 같은 형질도입이 필요하지 않다. 형질전환은 1928년 Fred Griffth에 의해 처음으로 발견되었으며, 형질전환을 담당하는 미지의 인자를 그는 transforming principle이라고 명명하였다. 16년이 지난 후에 Avery, Macleod, Mc Carthy으로 구성된 3명의 연구자들이 형질전환이 일어나는 요인은 DNA분자라는 것을 밝혔다.
형질전환은 세균들간에 유전물질을 상호교환하는 하나의 방법으로써 첫 번째로 밝혀진 방법이다. 형질전환은 주변환경으로부터 DNA를 받아들일 수 있게 자연적인 수용능력을 갖춘 수용체(competent cell)로써 하나의 세포를 필요로 하거나 여러 단계의 물리적인 조작에 의해서 인위적으로 DNA를 받아들일 수 있게 수용능력을 갖춘 세포를 필요로 한다.

<중략>

Methods
냉각된 competent cells 200μl을 1.5ml tube에 옮긴다.
Tube에 DNA 10 μl을 더한다.
Tube를 섞어준 후, 30분 동안 ice에 보관한다.
42℃로 예열된 waterbath에 tube를 옮기고 90초 동안 보관한다. (tube를 흔들지 않는다.)
빠르게 ice로 tube를 옮긴 후, 2분 동안 cell을 냉각한다.
각 tube에 LB broth 800 μl을 더한다.
37℃로 예열된 waterbath에서 45분 동안 tube를 보관한다.
Ampicillin이 포함된 LBA plate 위에 transformation된 competent cells의 적당한 양을 옮겨서 spread한다.
Liquid가 흡수될 때까지 room temperature에서 잠시 plate를 둔다.
Plate를 뒤집어서 37℃에서 incubation한다.

참고 자료

박용호, 동물유전공학, 선문각, 1996,
주우홍, 미생물유전학, 월드사이언스, 2006,
T.A Brown, 유전자 클로닝 입문, 탐구당, 2004,
유주현, 응용미생물학실험, 효일, 2007,
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