[생물학 실험보고서] Mini scale preparation of plasmid DNA

소개글

E.coli 의 plasmid DNA를 추출하는 기술로서 alkaline lysis 를 이용하여 plasmid DNA를 추출하고, 이를 제한효소로 분석하여 검증하는 실험입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Materials and Methods

4. Data and Result

5. Discussion

6. References

본문내용

Abstract
이번 실험은 유전자 재조합에 가장 빈번하게 사용되는 E.coli 의 plasmid DNA를 추출하는 기술로서 alkaline lysis 를 이용하여 plasmid DNA를 추출하고, 이를 제한효소로 분석하여 검증하는 것이었다. Alkaline lysis를 이용한 Mini-scale preparation of plasmid DNA는 먼저, E.coli 세포를 깨트리고, alkaline 조건을 제공하여 DNA를 denature 시킨 후, 다시 pH를 중화시켜 다른 물질은 침전시키고, 마지막으로 에탄올을 이용하여 plasmid DNA를 침전시켜 최종적으로 plasmid DNA를 얻는 것이다. Cell은 앞선 실험에서 insert를 접합하여 형질 전환시킨 것을 LB medium에 접종하여 overnight incubation하여 사용했으며 좀 더 순도가 높은 DNA를 얻기 위하여 Phenol/ Chloroform 용액을 이용하여 잉여 단백질을 제거하였다.

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Discussion
이번 실험은 유전자 재조합에 가장 빈번하게 사용되는 E.coli 의 plasmid DNA를 추출하는 기술로서 alkaline lysis 를 이용하여 plasmid DNA를 추출하고, 이를 제한효소로 분석하여 검증하는 것이었다. Cell은 앞선 실험에서 insert를 접합하여 형질 전환시킨 것을 LB medium에 접종하여 overnight incubation하여 사용했으며 좀 더 순도가 높은 DNA를 얻기 위하여 Phenol/ Chloroform 용액을 이용하여 잉여 단백질을 제거하였다. 또한 정확한 검증을 위하여 아무 효소도 처리 하지 않은 것, RNase만 처리한 것, RNase와 BamHⅠ만을 처리해 single cut 한 것 및 RNase, BamHⅠ과 XbaⅠ을 동시에 처리하여 Double cut 한 것을 전기 영동 하여 그 결과를 비교하였다. 실험결과, <Figure 1>과 같이 RNase 처리의 효과를 알 수는 있었지만 그 외 single cut과 double cut은 band가 제대로 형성되지 않아 plasmid DNA가 제대로 추출되었는지를 확인 할 수 없었다.

참고 자료

Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, pp1.32~1.34/pp1.90~1.92
연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 http://biochemistry.yonsei.ac.kr/
http://bitesizebio.com - 5 Ways to Clean up a DNA Sample