단백질 정량 실험 개요 및 프리레포트

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단백질정량 실험에 대한 개요및 실험방법 프리레포트입니다.

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본문내용

실험 1. 맥아의 산성 탈인산 가수분해효소 (acid phosphatase) 의 단백질 정량
< Lowry method >
* 실험방법
1. 표준물질인 BSA (1mg/ml, 300μl ) 를 2배씩 희석한다.
(농도 : 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25 μg/ml)
이 때, BSA : PBS = 1:1로 섞어 희석한다.
2. 미리 분리한 맥아 추출물 (Ⅰ~Ⅲ, 10μl)을 50배 희석하여 정량에 사용한다.
이 때, 맥아 추출물 : PBS = 1: 49 비율로 희석한다.
3.표준물질과 샘플, blank를 microtube 에 75μl씩 넣는다. blank로 PBS를 75μl 넣는다.
4. 375μl 시약 C를 microtube에 넣고 잘 섞은 후 실온에서 10분간 방치한다.
* 시약 C 만드는 방법
Lowry 시약 A ( 0.1M NaOH, 2% Na2CO3, 5ml ) + B1 시약 (1% CuSO4⦁H2O, 50μl)
+ B2 시약 ( 2% Na/K tartrate, 50μl)
5. Folin - Ciocalteau 시약을 50μl 가하고 즉시 교반 시킨다.
6. 잘 섞은 시료를 실온에서 30분 방치 후, 96-well microplaate에 200μl씩 분주한다.
7. O.D 750nm에서 흡광도를 측정한다.

참고 자료

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