Transformation

소개글

Transformation 실험

목차

Theme(제목)

Abstract(요약)

Materials & Methods (도구 & 방법)

Principle(원리)

Results(결과)

Discussion(고찰)

References(참고문헌)

본문내용

t 상태로 만들고 DNA가 잘 흡수되게 만든 후 transformation 실험을 통하여 Ampicillin에 저항성이 있는 대장균을 만들었고 그 다음 저항성 균주를 따로 분리하기 위하여 항생제를 포함하고 있지 않은 배지와 Ampicillin를 포함하는 배지를 만들어 spreading하였다. 이때 흰색을 띠는 colony가 생성 된다면 이것이 형질전환을 통하여서 Ampicillin저항성 유전자를 갖는 세포가 되는 것이다.
방법)
plasmid vector, ligase mixture, LB media, CaCl2용액(50mM CaCl2, 10mM Tris-Cl, pH8.0), mac/Am plate, 아이스박스, 얼음, micropipette, 37℃ Incubator, tube, 알코올램프, E. coli, 원심분리기, glycerol
first culture(12시간)한 cell을 second culture하고 cell havesting를 하였다. 배양액 1ml를 따서 원심분리하고 상등액을 버린 후 다시 원심분리 하여 나머지 액체를 없앤 후 100mM CaCl 1ml를 첨가하여 cell을 vortex에 잘 풀어 주었다. 4℃ 30min 아이스 박스에 넣었고 그 후 30초간 원심분리 하고 상등액을 조심스럽게 버린 후 150㎕의 CaCl를 첨가하고 ligation mixture를 2㎕정도 넣고 pipeting하고 4℃ 30min 아이스 박스에 넣었고 그 후 42℃에서 1분 30초간 heat shock 후, 얼음에 넣고 2분간 방치(cold shock)하고 LB media를 300㎕넣고 37℃에서 30분 정도 preincubation하고 mac/am plate에 200㎕씩 spreading하고 incubation하였다.

참고 자료

없음