Plasmid prepration

소개글

Plasmid prepration

목차

Theme(제목)

Abstract(요약)

Materials & Methods (도구 & 방법)

Principle(원리)

Results(결과)

Discussion(고찰)

References(참고문헌)

본문내용

Ampicillin 저항성 하는 방법은 다양하지만 모두가 기본적인 3과정을 포함하고 있다. 첫번째로 미생물 배양에 의한 plasmid의 증폭 두번째로 미생물 수집과 세포 용균 세번째로 plasmid의 정제이다. 하지만 미생물을 배양 할 때 배양액에 ampicillin를 첨가하여 ampicillin 저항성 Plasmid를 가지고 있는 균만 배양해야 하지만 이번 실험에서는 그냥 배양을 하여 전기영동 결과 아주 작은 Plasmid DNA밴드만을 확인 할 수 있었다.
방법)
37℃ incubator, microcentrifuge, 1.5ml tube, Micropipette, glucose, Tris-Cl, EDTA, NaOH, SDS, potassium acetate, glacial acetic acid, D. W, phenol, chloroform, 70% EtOH, 100% EtOH, sodium acetate, 1% agrose gel, TE, ice
solution 1 [ glucose, Tris-Cl(pH 8.0), EDTA(pH 8.0) ]
solution 2 [ NaOH, SDS ]
solution 3 [ potassium acetate, glacial acetic acid ]
37℃ incubator에서 키운 bacteria를 1.5ml tube에 넣어 주었고, 원심분리기를 이용하여 4℃, 12,000rpm에서 1분간 돌려 준 뒤 상등액을 제거 해 주었다. 그 다음 sol.1 용액을 100μl 넣어 준 후 실온에서 5분간 기다린 후 sol.200μl 넣어 준 후 좌우로 5번 정도 흔들어 준 후 얼음에 꽂아서 10분간 기다렸다. 그 다음 3번 용액을 150μl 넣어 준 후 좌우로 10번 정도 흔들어 준 후 얼음에 꽂아서 5분간 기다린 후 원심분리기에서 4℃, 12,000rpm으로 10분간 돌려주고 원심분리가 끝나고 상등액(400μl)을 따서 새로운 tube에 넣어 주고 RNase를 1μl 넣어 주었다. chloroform 400μl을 넣어 준 후 vortexing하여 주었고 다시 원심분리기에 넣어 4℃, 12,000rpm으로 10분간 돌려 준 후 끝나고 상등액(400μl)을 새로운 tube에 넣어 주었다.

참고 자료

없음