소개글
제한효소 반응에 의한 제한효소 지도 작성 실험.
제한효소의 기능, 반응 원리.
BamHI, PvuII, XbaI, EcoRI의 특징
제한효소 지도 작성법.
pUC19, pBR322 플라스미드의 특징
제한효소 반응을 하고 전기영동 및 그 결과를 분석하는 실험 등에 대한 내용입니다.
목차
1. 실험목적
2. 원리 및 이론
1) Restriction enzyme의 기능
2) 제한효소에 의한 DNA digestion 실험의 원리
3) BamHI, PvuII, XbaI, EcoRI의 특징
4) Restriction mapping
5) pUC19, pBR322의 제한효소 자리
3. Reagent
4. Method
1) Gel caster를 준비한다.
2) 표 4.와 같이 시료를 준비한다.
3) EtBr staining
4) Gel documentation system으로 Gel을 관찰한다.
5. Result
6. Discussion
본문내용
1. 실험목적
Plasmid DNA를 restriction enzyme(제한효소)로 처리하여 restriction enzyme의 특성과 plasmid의 특성을 이해한다. Agarose gel 전기영동의 원리를 이해하고, 크기와 모양에 따른 DNA의 위치를 통하여 제한효소 지도를 작성한다.
2. 원리 및 이론
1) Restriction enzyme의 기능
제한효소는 DNA 사슬 상의 특정한 염기배열을 인식한 후, DNA의 두 사슬을 모두 절단하는 endonuclease인데 인식하고 절단하는 염기배열에 따라 세 종류(I, II, III)는 특정 염기배열(일반적으로 4~6개의 염기쌍으로 구성됨)을 인식하고 인식한 염기서열 내의 특정 부위를 절단하고 그 결과로 3’ 끝이나 5’게 사용되고 있다.
예를 들어 EcoRI의 경우, 5’-GAATTC-3’의 서열을 인지하고 절단하여 5’ 끝이 밖으로 나온 sticky 형태의 DNA를 만들게 된다. PvuII의 경우, 5’-CAGCTG-3’의 염기서열을 인지하고 절단하여 끝이 무딘
6. Discussion
pUC19의 사이즈는 2,686bp이고 PvuII 제한효소 자리는 플라스미드 내에 baI, EcoRI 제한효소 자리는 한 군데씩 존재한다(표 5.). 제한효소 자리가 한 군데만 있는 제한효소로 반응시키면 2,686bp의 linear한 DNA 산물이 생성되고, 제한효소 자리가 두 곳이 있는 PvuII의 경우에는 322bp, 2,364bp의 두 개의 DNA 산물이 생성되어야 한다. 제한효소를 첨가하지 않은 대조군의 경우 2,868bp 크기의 환형의 supercoiled DNA이므로, 같은 크기의 선형 DNA인 BamHI 반응산물보다 더 많이 migration 된 것을 볼 수 있었다(그림 7-①). 한 군데의 제한효소 자리를 갖는 BamHI으로 잘려진 DNA는 선형이므로 대조군보다 덜 이동된 위치에 하나의 밴드가 나타났다(그림 7-②). PvuII의 제한효소 자리는 두 곳이 존재하므로 제한효소 반응 후 322bp와 2,364bp 두 개의 DNA 산물이 생성되어야
참고 자료
1. T.A. Brown, Gene Cloning and DNA Analysis (4th edition), pp53-84, Blackwell Publishing, 2001
2. 한국생화학회, 실험생화학, pp334-342, 탐구당, 2004
3. T. Strachan, Human Molecular Genetics (3rd edition), pp140-149, Garland Publishing, 2004
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