Northern blot analysis

소개글

Northern blot analysis에 대한 레포트 입니다
Northern blot analysis와 RNA prep. transfer probe에 관한 내용이 수록되어있습니다

목차

1) Northern blot analysis
Northrern Hybridization
Northern blot의 한계, 단점, 장점
Experimental design
Northern blotting의 문제점과 대책
Dot blot hybridization

2) Formaldehyde gel을 이용한 RNA 분리
RNA electrophoresis에 영향을 주는 인자

3) RNA를 Gel에서 Membrane으로 Transfer하는 방법
Capillary transfer
Electrophoretic transfer
Vacuum transfer
TurboBlotter Capillary Transfer
3)Probe 종류 & 각 Probe의 차이점

Reference

본문내용

1. Subject: Northern analysis
2. Object: Northern analysis의 원리와 방법을 이해하고,
RNA preparation을 통해 추출한 RNA을 이용하여 Northern blot을 시행한다.
3. Introduction
1) Northern blot analysis
-1977년 James Alwine와 George Stark가 agarose gel 전기영동으로 분획한 RNA를 membrane으로 옮기는 방법을 개발.
- 기본적인 원리는 Southern blot과 동일.
- Northern blot은 RNA의 정성, 정량을 시행하기 위하여 이용.
- RNA의 크기나 발현량에 관한 정보가 얻어져 mRNA의 발현이 어느 정도 이루어져 있는가를 알 수 있음.
- Notrhern blot을 통하여 single membrane에 있는 과다의 메시지를 비교할수 있고, transcript size를 결정할수 있으며 alternative spliced product를 결정할수 있음.
Figure1. northern blotting의 전체적인 step과 필요한 시간.
- 분리한 총 RNA, 혹은 poly(A) RNA에 존재하는 특정 mRNA 분자의 크기와 양을 결정할 수 있는 효과적인 방법.
-우선 RNA를 denaturing agarose gel상에서 전기영동하여 그 분자량 크기에 따라 전개시킨 다음 활성화된 cellulose, nitrocellulose, glass 혹은 nylon membrane에 옮긴다. 분석하고자 하는 RNA는 방사선 동위원소로 표식된 특정 DNA 혹은 RNA와 hybridization된 후 autoradiography을 시행함으로써 그 양과 위치를 결정.

참고 자료

Current Protocols in Molecular Biology (1997) 4.9.1-4.9.16
임상 분자생물학 (1999) 이동호 출판사 홍 p. 157-171
http://www.agron.missouri.edu/mnl/73/16macrae.html
http://www.whatman.com/TurboBlotter.aspx