검량선 작성법, 시료전처리방법(단백질 침전법, 고체상 침전법, 액체-액체 침전법), HPLC-UV 그래프 결과분석 레포트

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목차

1. 검량선 작성(절대검량선법, 내부표준법)
2. 시료전처리방법(PP, SPE, LLE)
3. HPLC-UV 그래프 결과분석
4. 출처

본문내용

정량적으로 크로마토그래피 분석을 하는 가장 직접적인 방법은 미지 시료의 조성과 비슷한 일련의 표준 용액을 준비하는 것과 관련이 있다. 크로마토그래피에서의 정량 분석은 크게 피크 면적이나 피크 높이가 시료의 농도에 비례한다는 원리 아래에 농도를 산출한다. 표준물질에 대한 크로마토그래피를 진행해 피크 높이나 면적을 함수로 나타내어 검량선을 작성한다.

1) 절대검량선법, 외부표준법(External calibration)
측정된 넓이(또는 높이)와 성분량과의 관계를 구하는 다양한 정량법 중에 절대검량선법 (외부표준법)은 정량하려는 성분으로 된 순물질을 단계적으로 취하여 크로마토그래피 결과를 기록하고 피크의 면적(또는 높이)을 구한다. 이 것으로부터 성분량을 X축에, 피크의 넓이(또는 높이)를 Y축에 취하여 검량선을 작성한다. 방법은 간단하나 주입된 시료의 양을 정확히 알아야 하고, 검출기의 감도가 분석할 때마다 다르므로 항상 새로 검량선을 만들 필요가 있다. 또한 이 방법을 사용할 때에 표준용액이나 실험용액의 용매가 휘발성으로 농도가 변화하는 경우가 있어 세심한 주의가 필요하다.

2) 내부표준법(Internal calibration)
내부표준법은 정량하려는 성분의 순물질 일정량에 내부표준물질의 일정량을 가한 혼합시료의 크로마토그래피 결과를 기록하여 피크의 넓이를 측정한다. X축에 정량하려는 성분량과 내부표준물질의 비를 취하고 분석 시료의 크로마토그래피에서 측정한 정량할 성분의 피크 넓이와 표준물질의 피크넓이의 비를 Y축에 취하여 검량선을 작성한다. 이 방법은 주입된 양을 정확히 측정할 필요가 없고 검출기의 반응이 변하더라도 넓이의 비에는 영향을 미치지 않는다는 장점이 있다.

*내부표준물질(Internal Standard, IS)
내부표준물질이란 분석하려는 시료에 들어있지 않은 물질을 의미한다. 내부표준물질 일정량을 표준용액과 시료용액에 가하여 크로마토그래피 결과를 얻은 다음 분석 목적 물질의 양을 상대적으로 계산하는 것이다.

참고 자료

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이매스교육센터https://emass.co.kr/y4/sub/? SPE, LLE 방법
https://www.shimadzu.com/an/service-support/technical-support/analysis-basics/basic/absorbance_detector.html
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/industrial/chromatography/chromatography-learning-center/liquid-chromatography-information/hplc-basics.html