Exp. 1 Recombineering, Generation of a target gene by overlap extension PCR
- 최초 등록일
- 2021.03.31
- 최종 저작일
- 2020.04
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소개글
"Exp. 1 Recombineering, Generation of a target gene by overlap extension PCR"에 대한 내용입니다.
목차
I. Abstract
II. Introduction
III. Materials
IV. Methods
V. Results
VI. Discussion
VII. References
본문내용
I. Abstract
본 실험은 Polymerase Chain Reaction(PCR)의 기법중 하나인 Overlap extension PCR의 원리를 Recombineering을 이용하여 이해하고 과정을 익히는 것을 목적으로 한다. PCR은 polymerase chain reaction으로 중합효소 연쇄반응이다. 소량의 유전물질로부터 염기순서가 동일한 유전물질을 많은 양으로 검출할수 있으므로 인간의 DNA를 증폭하는 방법이다. 뿐만 아니라 세균이나 바이러스, 진균의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단에 사용된다. 현시대에 많은 바이러스들이 생겨나는 시점에 생명공학자로써 매우 중요한 기술이라고 볼 수 있다. 본 실험에서 사용된 overlap extension PCR은 다른 PCR과 다르게 primer를 사용하지 않고 2개 이상의 DNA fragment들을 동일한 농도에 놓고 서로 상동부위를 연결시켜 주는 PCR기법이다. PCR 실험에서 사용된 DNA fragment들은 대장균의 DnaK promoter와 당근의 DcHsp17.7 gene을 이용하였다. 두 개의 DNA를 PCR한 후 각각의 DNA fragments 와 2X phusion master mix ,D.W.를 멸균된 e-tube에 첨가하고 Overlap extension PCR을 통해 유전자 재조합을 하였다. PCR 결과를 확인하기 위해 1% agarose gel에서 전기영동을 통해 확인하였다. 그 결과 Overlap extension PCR을 통해 얻은 products는 3개의 band가 나타났지만 약 800bp의 밴드가 형성된 것으로 보아 성공적으로 증폭되었음을 확인할 수 있었다. 이번 실험을 통해 Overlap extension PCR의 원리와 실험과정을 익힐 수 있었고 Overlap extension PCR의 장점과 플라스미드의 유전자조합과의 차이에 대해 알아볼 수 있었다.
참고 자료
https://en.wikipedia.org/wiki/Recombineering
위키피디아 – recombineering
https://www.scienceall.com/plasmid/
사이언스올 – 플라스미드
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6814055/
NCBI- Customized one-step preparation of sgRNA transcription templates via overlapping PCR Using short primers and its application in vitro and in vivo gene editing
Avadaa-PCR 기본이론소개
younginfrontier.com
