Ion-Exchange Chromatography for divide into ion-charge of protein(이온교환 크로마토그라피를 이용한 단백질 분리)

목차

1. Introduction
2. Materials and Methods
3. Results
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Introduction

1.1.실험목적

Ion-Exchange Chromatography의 원리를 이해하고 두유를 Ammonium sulfate 30% concentration에서 salting out된 단백질 시료를 이용하여 각종 단백질의 이온과 resin의 이온 상호작용의 차이에 따라 단백질을 분획한다.

1.2.실험원리

1.2.1. Ion-exchanger

특정 pH에서 단백질이 net charge를 띠고 있다면, ion-exchange chromatography를 통해 그것을 분리해내기 위해서는 ion exchanger가 단백질의 charge와는 반대 전하를 띠고 있어야 한다. 즉, 주어진 pH에서 음전하를 띠는 단백질이라면 양으로 하전된 ion exchanger을 사용해야 한다는 것디아. Ion exchanger은 일반적으로 전하를 띤 group이 불용성의 matrix와 결합하고 있는 모양새로, matrix로는 agarose나 cellulose, acrylamide 등의 중합체가 주로 사용되며, 작은 구슬(beads) 모양을 하게끔 한다. Ion exchanger의 종류는 두 가지가 있는데, 양으로 하전된 group을 가지고 있어 anion과 결합하는 anion exchange matrix와, 음으로 하전된 group을 가지고 있어 cation과 결합하는 cation exchange matrix가 그것이다. 대표적인 anion exchanger로는 DEAE(diethylamino ethyl)가 있고, cation exchanger로는 CM(carboxymethyl)이 있다.

<중 략>

Column에 거름종이를 깔고 증류수를 떨어뜨려서 자리를 잡도록 한다. 그리고 준비한 레진과 Buffer 혼합물을 packing 하는데 주사위로 혼합물을 강하게 빨아 당겼다 내 뿜었다를 반복하여 resin이 잘 섞이게 한 다음 column의 벽면에 천천히 분사한다. 이 과정을 반복하여 resin을 packing 하는데 매우 천천히 그리고 중간에 쉬지 않고 packing 해야 하는데 실험실 여건상 빠르게 진행하고 중간시간에 타이밍을 놓쳐 시간을 두고 packing을 진행하였다.

2.5. Protein column packing

resin column packing 위에 resin과 평행하도록 적당크기의 거름종이를 올리고 buffer를 넣어 거름종이를 고정시키고 앞선 실험에서 Ammonium sulfate 30% concentration에서 salting out된 단백질 시료를 거품이 생기지 않도록 흘려보낸다. 그러면 resin과 단백질이 반응하여 –차지를 가진 단백질들은 +차지를 가진 resin에 붙게 되고 +차지의 단백질들은 밑으로 나오게 되는데 이 결과물을 sample1에 보관한다.

참고 자료

단백질실험핸드북, 강호일, 월드사이언스, 2007, p32~52
단백질실험노트(개정) 상권, 김승호·장규태, 월드사이언스, 2001, p135~174 ‘DEAE’에 대한 Wikipedia 검색, 그림자료 –