[학사학위논문] Anti-Rat DARP Polyclonal Antibodies의 특성 규명

소개글

자연과학대학 학부 졸업 논문 입니다. 학사 졸업논문 작성해야 하시는 분들께
좋은 예시문이 될꺼라 생각합니다.

목차

목 차 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ⅰ
LIST OF FIGURES ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ⅱ
LIST OF TABLES⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ⅲ
ABBREVIATIONS ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ⅳ

Ⅰ. 서 론 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 1
Ⅱ. 실험 재료 및 방법 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 5
1. 실험재료
1-1. 실험동물
1-2. 실험 cDNA 및 primer
2. 실험방법
2-1. Indirect ELISA
2-2. E.coli에서 재조합 단백질로서의 발현
2-2-1. MBP-DARP 융합 단백질의 발현과 정제
2-2-2. Trx-6xHis-DARP 융합단백질의 발현 및 정제
2-3. Western blot
2-4. 동물 세포에 transfection된 단백질의 발현
2-5. Mouse 심장조직 lysate
Ⅲ. 결 과 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 9
1. 항체제작과 ELISA를 이용한 역가 확인
2. DARP 특이적 항체 제작 여부 확인
2-1. Anti-rat DARP의 MBP-DARP 융합 단백질 인식
2-2. Anti-rat DARP의 Trx-6xHis-DARP 융합 단백질 인식
2-3. Anti-rat DARP의 동물 세포 transfection 단백질 인식
2-4. Anti-rat DARP의 in vivo DARP 특이적 인식
Ⅳ. 고 찰 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 19
Ⅴ. 참고문헌 ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 21
ABSTRACT ⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅ 23

본문내용

Diabetes related ankyrin repeat protein (DARP) 는 2003년도에 Ikeda 그룹이 생쥐에서 처음으로 동정하였고 심장, 갈색지방세포, 그리고 골격근에서만 특이적으로 발현된다고 알려져 있다. DARP는 제2형 당뇨병과 인슐린 내성을 지닌 KKAy 모델 mouse에서 과발현(overexpression) 되는데 이와 연관하여 DARP가 에너지 대사과정에 관여할 것으로 알려졌으나, 이에 대한 구체적인 연구결과는 현재까지 미미한 실정이다.
본 실험실에서는 DARP의 기능연구를 위한 기본도구로 사용하기 위하여 E.coli에서 GST-DARP 융합단백질을 정제하였고 이를 항원으로 하여 BALB/c mouse 복강에 주사하여 다중클론항체를 제작하였으나 이의 특이성을 규명하지 않았다. 따라서 본 연구에서는 제작된 다중클론항체의 특이성을 ELISA 와 Western blot 분석을 통하여 확인하고자 흰쥐 DARP cDNA를 E.coli 발현벡터인 pMAL-c2 와 pET32a(+) vector에 subcloning 하여 각각 MBP-DARP 융합단백질과, TRX-6xHis-DARP 융합단백질로 발현유도 및 정제하였다.

참고 자료

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Derman A.I., Prinz, W.A., Belin, D., and Beckwith, J. (1993) Mutations that allow disulfide bond formation in the cytoplasm of Echerichia coli. Science 262, 1744-1747
Kim, J.H., Park, J.H., Ju, S.K., Lee, M.K., and Kim, K.L., (2001) Generation and characterization of a monoclonal antibody with high species-specificity to Schistosoma japonicum glutathione S-transferase, Immune Network 1, 187 -195
LaVallie, E.R., DiBlasio, E.A., Kovacic,S., Grant, K.L., Shendel, p.F., and McCoy, J.M, (1993) A thioredoxin gene fusion expression system that circumvents inclusion body formation in the Echrichia coli cytoplasm. Bio/Technology 11, 187-193
Ikeda K., Emoto N., Matsuo M., Yokoyama M., (2003) Molecular identification and characterization of a novel nuclear protein whose expression is up-regulated in insulin-resistant animals. J Biol Ch