(directional cloning) insert (4731bp) 800bp 사용 NheⅠ vector 7100bp 사용 XmaⅠ XmaⅠ XbaⅠ NheⅠ과 XbaⅠ는 절단 부위가 ... transformation 시켜서 삽입여부를 확인한다. ① ② ③ ④ amp 배지 (insert) (vector) ① 제한효소로 절단 후 purification 1) insert는 NheⅠ ... 세균배양액 ( LB media / LB+Amp plate)을 만든다. ② insert와 vector에 각각 제한효소로 자르고 전기영동 후 필요한 부분을 자른다. - insert는 NheⅠ
셋째, 제한효소가 비활성인 경우이다(온도가 너무 높거나 낮아서 30℃와 37℃에서 각각 반응하는 ClaⅠ와 NheⅠ가 모두 반응하지 않을 수 있다. ... 두 제한효소 ClaⅠ와 NheⅠ에 의해 두 부분으로 절단된 후 관찰된 Gene A는 약 500bp이고, 나머지 잘린 부분은 약 6000~8000bp이다. ... lcode=D044101 NheⅠ – TaKaBa Hyperlink "https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?
Ⅰ. Abstract유전자 재조합은 특정 서열을 vector에 삽입하는 것으로, 재조합된 유전자를 복제하는 기술은 다양한 생물학 분야에서 사용되고 있다. 본 실험은 다음 실험에 사용될 insert DNA와 vector를 준비하는 것을 목적으로 하였다. insert DN..
Insert 역시 제한효소 NdeⅠ과 NheⅠ로 처리해주었다. ... 우리가 실험에서 사용한 제한효소 NdeⅠ과 NheⅠ는 각각 20 unit/㎕, 10 unit/㎕이다. ... Vector를 제한효소 NdeⅠ과 NheⅠ로 각각 처리해준 후 vector끼리의 재결합을 막기 위해 CIAP처리도 해주었으며 이를 전기영동으로 확인했다.
제한효소(NheⅠ)가 적은양이 들어가기 때문에 제대로 활성을 못할 우려가 있는데 BSA가 이것을 도와줌. NdeⅠ, NheⅠ : 제한효소. ... 다음으로 각 조가 뽑은 Insert에 D.W., 10× buffer, 10X BSA, NdeⅠ, NheⅠ를 총 50㎕가 되게 한다. ... 실험 방법은 먼저 각 조가 뽑은 plasmid DNA에 D.W., 10× buffer, 10X BSA, NdeⅠ, NheⅠ를 총 50㎕가 되게 만들어 준다.
처리하면 좋지 않으 므로 적당량과 적당한 시간만 처리하는 것이 중요하다.) ii) 각 조가 뽑은 Insert 35㎕ 10× buffer 5㎕ 10X BSA 5㎕ NdeⅠ 0.5㎕ NheⅠ ... micropipette으로 다음과 같이 넣어 spin-down 한다. i) 각 조가 뽑은 plasmid DNA 35㎕ 10× buffer 5㎕ 10X BSA 5㎕ NdeⅠ 0.5㎕ NheⅠ