[미생물] 형질전환

목차

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본문내용

1-2. Competent cell 의 제조방법
Calcium chloride를 이용한 competent cell의 대표적인 제조방법은 다음과 같습니다.
1.LB plate에 자란 DH5 alpha colony를 LB 배지 2 ml에 접종한 후 밤새 키웁니다.
2.위에서 키운 배양액 1 ml을 100 ml LB 배지가 담긴 플라스크에 넣고 O.D.600이 0.4가 될 때까지 37°C shaking incubator에서 키웁니다.
3.배양액을 50 ml conical tube에 넣고 얼음에 10분간 놓아둡니다.
4.4°C에서 4,500 rpm으로 10분간 원심분리합니다.
5.상층액을 완전히 제거한 후 미리 차게 해 둔 0.1 M filtered CaCl2 용액을 원래의 1/2 부피로 넣고 부유시킵니다.
6.얼음에 15분 놓아두었다가 다시 4°C에서 3,000∼4,000 rpm으로 10분간 원심분리합니다.
7.상층액을 버리고 처음의 1/10 부피의 filtered CaCl2 용액으로 부유시킵니다.
8.얼음에 30분 놓아두었다가 미리 차게 해둔 microfuge tube에 200 ul씩 분주하고, 사용할 때까지 deep freezer에 보관합니다.
위 방법은 사실 가장 간단한 방법으로, 최근에는 잘 쓰지 않습니다. Transformation의 효율을 높이기 위하여 사람들이 여러 방법을 modify해서 쓰고 있는데, 예를 들어 어떤 물질을 첨가한다든지, 균을 낮은 온도에서 키운다든지 하는 방법입니다.