[생물학] 형광현미경

목차

2)배양계수법
1)세균체적을 이용한 측정
2) 생화학적 분석
4 미생물 활성도 측정

본문내용

형광현미경을 이용한 직접계수법은 배양계수법과 달리 다양한 미생물의 생리과정, 서식지, 집단의 크기와 종류에 상관없이 응용할수 있으며, 생물량 측정에도 응용된다. 세균의 크기를 측정하여 생물량을 구할수도 있는데 형광현미경에 연결된 화상분석기를 사용하면 간편하고 정확하게 생물량을 구할수 있다. 형광현미경으로 직접관찰할 때 분열중인 개체를 세면 자연상태에서 미생물의 생장률을 파악할 수 있다. 분열중인 세균의 빈도는 방사성 동위원소로 표시된 아데닌을 흡수하는 RNA합성속도와 같은 생장률과 매우 높은 상관관계가 있다. 이러한 FDC방법은 세균의 분열속도가 일정하다는 가정에 기초한다. 최근에는 전체 미생물과 호흡을 하는 미생물의 수를 동시에 측정하는 방법이 사용되고 있다. 호흡을 할 경우 전자전달계가 INT를 INT-formazan으로 환원시키면 형광현미경하에서 검붉은 반점으로 나타나기 때문에 형광염료로 염색된 세포 중에서 호흡을 하는 것만 선택적으로 계수할 수 있다. 또한 자기 방사법과 형광현미경을 함께 사용하여 활발히 대사를 수행하는 세균을 계수계수할 수 있다. 생균계수법은 활성이 있는 균을 세포분열 억제제인 날리딕산등을 첨가하여 6시간 정도 배양한 후 포르말린으로 고정하여 형광현미경으로 관찰하는 방법이다. 형광항체법은 형광염료를 항체에 결합시켜 항체가 미생물의 항원과 작용하도록 한 다음 현미경으로 관찰한다. 주사형 전자현미경은 미생물의 계수뿐만아니라 입자표면상의 미생물의 자연적인 분포를 볼수 있는 유용한 방법이다. 입자계수기를 이용하여 미생물을 계수할수도있다
2)배양계수법
배양계수법은 크게 평판계수법과 MPN법 두가지가 있다
(1)평판계수법
한천 평판계수법은 살아있는 미생물 계수에 널리사용되고 있다. 한천표면에 희석된 시료를 고르게 펴 주거나, 평판을 만들 때 시료현탁액을 한천과 섞는 방법이 있다. 시료를 가한후 적절한 조건에서 배양한 다음 생성된 콜로니를 계수한다. 시료를 농축하기위해 여과를 하는 경우에는 막여과지를 직접 한천표면에 올려 배양하고, 막여과지위에 형성된 콜로니를 계수한다. 필요에따라 선택적 배지를 이용하기도 한다.

참고 자료

없음