형광값(509nm)을 측정 및 비교함으로서 eGFP의 안정성 및 활성에 무 엇이 영향을 미치는지 알아본다. ... 0,30,60,90,120분)에 따른 온도(37,4,70°C), Proteinase K(1,3,5uL), Proteinase K (1,3,5uL) +Inhibitor Cocktail 1uL별 eGFP의 ... plate reader, 96 well plate Methods 단백질 분해효소: eGFP ①-③번은 400uL 넣고 각 온도반응. ④-⑨번은 100배 묽힌 GFP를 well plate에
본 실험에서는 eGFP를 얻어내기 위하여, 6x His-tagged eGFP가 insert된 pET28a(+)를 BL21(DE3) E.coli에 transformation하여 IPTG를 ... A280 nm로부터 얻어진 질량농도는 sample 내의 eGFP를 포함한 다른 단백질과 핵산에 의한 값이며, A488 nm로부터 얻어진 질량농도는 sample 내 eGFP를 잘 대변하는 ... Lowry assay로부터 얻어진 질량농도는 BSA를 standard로 한 값으로, BSA를 구성하는 Tyr, Trp, Cys의 수가 eGFP의 것보다 2배 이상 많아서 실제 eGFP의
농도별 BSA로 standard curve를 그려, 3개의 EGFP 샘플의 흡광도 평균으로 EGFP의 평균농도를 구했더니, EGFP sample 내의 기능적인 EGFP의 비율이 40.1% ... 따라서 EGFP의 흡광도를 안다면 EGFP의 농도를 구할 수 있다. 표2에서 얻은 EGFP의 세 샘플 평균 흡광도는 0.245333이다. 이를 식에 넣으면 아래와 같이 계산된다. ... 또한 Spectrofluorometer를 이용해 EGFP의 emission, excitation파장을 확인했더니, 각각 510㎚와 480㎚ 파장 부근에서 최댓값을 가지므로 EGFP라는
ㄷ.Thrombin 얻으려고 하는 단백질은 GST-EGFP퓨전 단백질이 아닌 EGFP이므로 GST와 EGFP의 결 합을 끊어주어야 하는데 이 역할을 하는 것이 바로 Thrombin이다 ... 목적 EGFP단백질을 GST-EGFP퓨전 단백질을 이용하여 분리&정제한뒤 SDS-PAGE법을 이용하여 분리 여부를 확인하여 본다. 2. ... GST와 EGFP가 분리되게 된다.
그 결과 EGFP의 발현을 HC11 세포에서 확인하였다. ... To demonstrate EGFP expression from knock-in vector, we are transfected knock-in vector that has EGFP ... 본 연구는 돼지 B-casein 유전자 위치에서 EGFP가 발현될 수 있는 knock-in 벡터를 구축하기 위하여 실시되었다.
ㄷ.Thrombin 얻으려고 하는 단백질은 GST-EGFP퓨전 단백질이 아닌 EGFP이므로 GST와 EGFP의 결 합을 끊어주어야 하는데 이 역할을 하는 것이 바로 Thrombin이다 ... 즉, 상대적으로 GST-EGFP를 GST와 EGFP로 잘라주었기 때문에 GST와(29.46 kilodaltons) EGFP (26.95kilodaltons) 2가지 모두가 cut용액에 ... GST와 EGFP가 분리되게 된다.
우리가 사용하는 EGFP는 이를 활용하기 쉽게 변형시킨 것으로 excitation max는 488nm, emission max는 510nm로 알려져있다. ... 더욱 정확한 실험을 위해서는 EGFP의 특성을 정확히 파악하고 각각의 정제 방법과 측정 방법을 이해하여 목적과 상황에 맞게 잘 이용하는 것이 중요하다. ... Title: 재조합 단백질 GFP의 발현, 정제, 측정 Abstract 이번 실험의 목적은 EGFP를 발현, 정제, 측정하여 각각의 정제 방법을 통해 순수 목적 단백질을 채취하고 이를
EGFP를 넣은 Cuvette의 흡광도() = 0.068 EGFP의 몰농도 (가 다르면 흡광도 값이 다르게 나올 수 밖에 없다. ... EGFP의 질량농도(mg/ml) = 희석한 EGFP의 질량농도(mg/ml) (희석배수) = 3 (500μl/20μl) = 0.075 mg / ml 실험 2. ... 따라서 희석 배수까지 고려해준 EGFP의 질량농도는 다음과 같다.
Extinction coefficient assay 에서는 PBS에 EGFP를 이용하여 실험을 진행하였다. 그 결과 EGFP는 488nm에서 최적흡광도를 가지는 특성을 보였다. ... EGFP의 질량 농도 = 희석된 EGFP의 질량농도 * 희석배수 = {(흡광도-y절편) / 기울기 } * 희석배수 (희석배수 = 투입된 단백질 샘플의 부피/ 총부피) = * () = ... BSA standard curve를 그리고, EGFP의 질량 농도를 계산한다.
EGFP extinction coefficient=61000cm-1M-1 EGFP MW=30.6kDa=30600g/mol 은 이미 알려져 있는 값들이고 EGFP의 몰 농도는 (흡광도 ... )/(extinction coefficient)/(cuvette length)*(dilution factor) 이고 EGFP의 질량농도는 EGFP의 몰 농도(mol/L)*EGFP MW ... EGFP의 질량농도 =(EGFP의 몰농도) * (EGFP MW) =0.0000066mol/l * 30600g/mol =0.20196mg/ml 이 때, 다음의 값들은 이미 알려져 있다고
두 번째는 transformation된 eGFP가 어떠한 이유로 변형되어 eCFP가 발현되었을 경우이다. eCFP는 eGFP의 돌연변이 형태로 238개의 아미노산들로 이루어진 eGFP ... 이는 실험 과정에서 eGFP가 아닌 eCFP를 활용하였거나, eGFP가 어떠한 이유로 변형되어 eCFP가 되었을 가능성이 있다고 생각한다. 2. ... 먼저, transformation된 유전자가 eGFP가 아닌 eCFP 발현 유전자일 경우이다. 이는 eGFP 제조업체에서 오류를 범하였을 경우 등을 상정하는 것이다.
질량농도(mg/ml) = EGFP의 몰농도 (mol/L) x EGFP MW (g/mol) = 0.00000984mol/L x 30600 g/mol = 0.301 mg/ml인 것을 ... ) =(0.024) ÷(61,000 cm-1M-1) ÷ (1cm) x(1000㎕/40㎕) =0.00000984 M EGFP의 MW = 30.6kDa = 30600g/mol 이므로 EGFP의 ... EGFP는 GFP보다 더 많은 빛을 흡수하여 단백질 정량을 할 때 더욱 높은 효율을 낸다.