6x His tagged eGFP 단백질의 발현 및 정제와 정량 및 정성적 특성 확인 Abstract 이번 실험에서는 단백질을 정제하고 그 정량적 특성과 정성적 특성을 여러 방법을 ... 정제에서 색이 연한 부분과 진한부분이 구분되어 정제된 이유는, eGFP와 Resin의 결합이 분리되기 때문에, Resin이 원래 색을 띠는 것이다. ... Discussion 이번 실험에서는 eGFP를 정제하고 각각의 정량적, 정성적 특성을 확인하였다.
6X His tagged eGFP 단백질의 발현 및 정제와 단백질의 정량 및 정성적 특징 확인 1. 실험 이론 및 원리 가. ... 이러한 단백질을 분리하고 정제하기 위해 쓰는 친화 크로마토그래피 (Affinity chromatography)는 단hole lysate와 정제된 EGFP sample을 SDS PAGE ... 전개후 비교해봤더니, 불순물이 제거된 정제된 EGFP sample이 whole lysate보다 더 깨끗한 밴드를 보였다.
재조합 단백질의 발현, 정제 및 정량 Abstract 이번 실험에서는 대장균에 6x Histidine으로 tagging 된 eGFP(enhanced Green Fluorescent ... 분리하고 Imidazole이 포함된 elution buffer을 이용해서 경쟁적으로 resin에 붙게 하여 Histidine으로 표시된 eGFP를 정제하였다. ... 정제한 eGFP의 발현정도를 확인하기 위해 SDS-PAGE를 이용하였다. SDS PAGE는 Sodium 통하여 측정된 시료가 어떤 단백질을 갖고 있는지를 알아낼 수 있다.
Title: 재조합 단백질 GFP의 발현, 정제, 측정 Abstract 이번 실험의 목적은 EGFP를 발현, 정제, 측정하여 각각의 정제 방법을 통해 순수 목적 단백질을 채취하고 이를 ... 더욱 정확한 실험을 위해서는 EGFP의 특성을 정확히 파악하고 각각의 정제 방법과 측정 방법을 이해하여 목적과 상황에 맞게 잘 이용하는 것이 중요하다. ... 실험결과 정제 후 황녹색의 형광을 띄는 EGFP를 확인할 수 있었고 이를 Extinction coefficient assay를 통한 측정값은 288nm에서 0.123mM, 480nm에서
이로써, sample 내에 있는 정제한 단백질이 eGFP임을 밝혔다. ... 현대생물학실험1 Report ❚ 분반 2반 ❚ 학부 생명과학전공 ❚ 담당 교수 ❚ 학번 ❚ 담당 조교 ❚ 이름 ❚ 실험 제목 6x His tagged eGFP의 발현과 정제 및 정량과 ... His-tagged protein이 denaturation되더라도 IMAC로 정제가 가능하다[4]. 단백질 정제 방법의 하나로 ultrafiltration이 있다.
), 4주차에 CO2 gas로 mouse를 안락사 시키고 심장에서 혈액을 채취하여 eGFP에 대한 항체가 들어있는 혈장을 얻어내었다. eGFP 정제과정에서 얻었던 Induction ... 결과) wash를 반복할수록 흘러내려오는 eGFP와 다른 물질의 양이 감소한 것으로 보아 정제가 잘 이루어졌다고 볼 수 있다. ... a = 0.263 ml이므로, PBS 0.737 ml에 정제된 eGFP 0.263 ml를 넣으면 최종 농도가 0.50 mg/ml가 된다.
이번 실험에서 정제할 단백질은 polyHis + eGFP 단백질이다. polyHis는 Ni-NTA resin에 대한 affinity를 부여하기 위해 추가된 것이며, eGFP는 형광이 ... 정제된 sample 중 elution에 해당하는 것에서만 eGFP의 fluorescence를 관찰할 수 있었다. 6주차엔 정제된 단백질 샘플을 SDS-PAGE로 분석하였다. ... 정제할 단백질은 poly Histidine + eGFP의 fusion protein이다. 우선 단백질의 발현 과정부터 알아보자.
이번 실험은 저번 실험에서 추출하고 정제한 RNA를 cDNA로 합성한 후 PCR로 증폭해 Agarose gel 전기영동으로 band를 확인해보는 실험이었다. ... 그 결과 EGFP(+): 5.4615uL, EGFP (-): 2.7203uL를 사용하게 되었다. ... 먼저 저번 실험에서 얻은 RNA의 농도는 EGFP(+): 367.6ng/uL, EGFP(-): 183.1ng/uL로, RNA를 1000ng으로 맞춰주기 위해 1000ng/RNA농도를
이번 실험을 통해 EGFP가 있는 세포와 EGFP가 없는 세포에 Trizol을 처리한 후 RNA를 정 제하여 nano drop을 이용해 농도와 순도를 알아보았다. ... 균질화하고 균질화된 용액을 원심분리하면 밀도가 낮은 지방, 단백질 등은 상층부에 뜨며 DNA는 중간 부위에 그리고 가장 밀도가 높은 RNA가 바닥에 침전되도록 하여 순수 RNA를 정제한다
Plasmid DNA 정제는 세균의 세포벽을 파괴하여 세균이 가진 Plasmid DNA를 얻는 것과 특정 Plasmid나 재조합 된 Plasmid를 추출하고 정제하는 방법이다. ... 소량의 배양액에 알칼리와 SDS를 사용하면 순수 분리정제가 가능하다. ... 원심분리를 통해 변성된 성분들을 제거하면 정제된 Plasmid DNA를 얻을 수 있다. 이를 통해 얻어진 Plasmid DNA는 전기영동이나 제한효소를 이용하여 확인이 가능하다.
친화성 크로마토그래피는 친화성을 이용한 보다 신속하게 단백질을 정제할 수 있는 방법으로 어느 한 단백질의 특성을 알고 있다면 보다 효율적이게 단백질 정제가 가능하다. ... chromatography, protein monomer와 oligomer 확인 Abstract 이번실험은 단백질의 혼합물들을 크로마토그래피, 분광광도계, gel등을 통해 분리, 정제하는 ... 이번실험에 분석할 단백질인 eGFP는 55900, mCherry는 72000, DsRed는 72500이라는 값을 가진다.
통해 생긴 항체를 얻고, SDS-PAGE와 Immunoblotting 방법 중 하나인 Western blot을 통하여 정제된 단백질의 특성을 알아보는 실험이다. ... 다른 Mouse로 실험을 진행했으며 Western blot을 통한 실험결과로 30kDa 근처의 eGFP Band가 나타났다. ... Antibody production and Western blot Abstract 이번 실험은 3주에 걸쳐 Antigen으로 사용될 eGFP를 Mouse에 Injection하여 면역반응을
또 RT-PCR법에 기초한 DDA(differential display analysis)를 할 때는 RT 산물을 일차 정제분획하는 목적으로 oligo(d을 인식하고 절단하여 파지의 ... 실험에 사용한 plasmid DNA pCDNA3.1-eGFP의 size는 6173 bp 그 중 eGFP의 size는 720 bp. ... Nanodrop을 통해 분석한 template DNA의 농도는 plasmid DNA pCDNA3.1-eGFP의 경우 105.4 ng/㎕ 그 중 eGFP의 농도는 2.5 ng/㎕.
Through the addition of eGFP.c1, the presence or absence of transfection could be determined by the fluorescence ... 수층을 피펫을 이용해 따게 되면 순수한 핵산을 정제할 수 있는데 이것이 첫 번째 단계에 해당한다. 나머지 단계에서는 isopropanol과 ethanol이 사용된다. ... 첫째로 sample의 층인 분리되는 phase separation, 둘째로 RNA를 침전시키는 RNA precipitation, 마지막으로 침전된 RNA를 ethanol로 다시금 정제하는
DNA Polymerase 는 Thermus aquaticus YT1 유래 DNA polymerase gene을 재조합 기술을 이용하여 E.coli로부터 발현시킨 후 순수 분리 정제된 ... 계산결과와 전기영동 결과가 일치하지 않은 이유로는 미리 조교님들이 제한효소를 이용하여 재조합 시킨 eGFP, Another gene 때문이다. ... T7 Promoter(~377bp)와 T7 terminator(~26bp)의 차이를 계산해주면 약 0.352kbp가 나오게 되고 여기에 eGFP(0.8kbp)와 Another gene
단백질 정제과정에서 용액에서 원하지 않는 단백질을 제거하는데 사용된다. ... 이번 실험에서 추출한 본래의 Plasmid 크기 5.493kbp에 0.8kbp(eGFP)와 1.7kbp(another gene)의 합인 7.993kbp에 비하면 약 1/2 크기의 수준인데 ... 단순한 산술에 의하면 추출한 Plasmid DNA의 크기는 본래의 크기인 5.493kbp에 0.8kbp(eGFP)와 1.7kbp(another gene)을 더한 7.993kbp이어야
