[유전공학]염기서열분석 방식

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염기서열 분석 방식에 대한 자세한 설명

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DNA 염기서열 결정 방법 중 가장 많이 이용되는 두 가지 방법은 Sanger 와 Coulson 의 효소적 방법과 Maxam 과 Gilbert 의 화학적 방법이다.

Sanger 와 Coulson의 방법은 DNA 쇄의 연장을 특이적으로 종료시키는 물질인 2,3` dideoxynucleoside triphosphate (ddNTPs) 가 사용된다. 이 물질은 데옥시리보오즈 (deoxyribose)의 3`위치에 수산화기가 없어, 정상적인 데옥시뉴클레오티드 (deoxynucleotide,dNTP)와 다르다. 그러나 다른 데옥시뉴클레오티드 처럼 DNA 중합효소의 작용에 의하여 5`triphosphate 쪽에 결합 하므로 DNA 쇄에 끼어들어가지만, 3`말단의 수산화기가 없어 다음 뉴클레오티드가 인산결합 (phosphodiester bond)을 형성할 수 없으므로 DNA 쇄의 합성이 종료된다. 만약 ddATP 를 사용하여 새로운 DNA쇄를 합성한다면 ATP가 들어가는 부위마다 합성이 종료되어 길이가 서로 다른 여러 종류의 DNA가 합성된다. ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP 를 사용하여 4 가지 반응을 동시에 시행한다면 각 반응 마다 일련의 서로 길이가 다른 DNA가 만들어지는데, 이것을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기 영동하여 길이에 따라 분리하면, A,C,G,T 위치에 따라 반응이 종료된 DNA 조각을 관찰할 수 있기 때문에 자가방사기록의 띠들을 차례로 읽으면 DNA 염기서열을 결정할 수 있다.

참고 자료

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