형질전환 (Transformation), 유전자 정제 및 전기영동 (gel electrophoresis)

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최초 등록일
2021.06.01
최종 저작일
2021.03
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목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Results
4. Discussion
5. Conclusion
6. Reference

본문내용

Abstract
5개의 plasmid DNA를 원심분리를 통해 prep하고 plasmid의 크기와 농도를 구한다. plasmid를 박테리아에 형질 전환하고 Agar plate에서 배양한 후 콜로니를 관찰한다.

1. Introduction
① 형질전환과 plasmid : 형질전환과 같은 수평적 유전자 이동을 통해 Bacteria에 우리가 원하는 유전자를 전달하고 발현한다. 그 매개체로 vector를 이용하는데 대표적인 vector로는 plasmid가 있다. Plasmid는 숙주 염색체와 별개로 복제될 수 있는 원형의 DNA 분자로서, 유전자의 발현을 위하여 숙주 세포의 자원과 기능을 이용한다. Plasmid는 한 가지 이상의 유전자를 암호화하고 있는데 그것은 숙주의 생장에 필수적이지는 않지만 특정 환경에 생존하기 위해 중요한 기능을 수행하는 경우가 많다. 이와 같은 plasmid의 독특한 특성을 이용해서, 특정 DNA조각을 클로닝하는 매개체로서 유용하게 이용될 수 있다.

<중 략>

4. Discussion
이번 실험에서는 총 2가지의 실험을 했다. 첫 번째는 transformation, 두 번째는 Plasmid isolation and agarose gel electrophoresis이다. 첫 번째 실험에 관해서는, 암피실린 배지에 도말한 colony의 수를 관찰하였다. 이 때, plate 3,4는 비슷한 CFU의 값이 나왔지만, plate 1,2에서는 낮은 CFU 값이 나왔고 water을 넣어 아무런 형질 전환이 되지 않은 plate 5에서는 colony가 나오지 않아 CFU 값이 0이다. 이렇게 CFU 차이나 나는 이유에는 여러 가지를 생각해 볼 수 있다. 첫 번째로 plate에 glass 봉을 이용하여 spreading 할 시에 열을 제대로 식히지 않아 competent cell이 열에 의해 변형된 것이다.

참고 자료

윤경식∙김호식 외 역, 레닌저 생화학 제 6판, 2014
.A. Brown, 유전자 클로닝과 DNA 분석, 월드사이언스, 2012
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