[화학공학실험] 실리카입자를 이용한 효소 고정화 실험 결과보고서(실험레포트)

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목표

3. 실험 일자, 조, 조원

4. 실험결과
1) Standard solution
2) BCA assay (Protein assay)

5. 고찰

본문내용

5. 고찰
이번 실험의 목적은 알고 있는 BSA의 농도와 측정한 흡광도로 그래프를 그리고 고정화한 Sample의 흡광도를 통해 효소, 즉 단백질의 농도를 추산해내는 것이었다. 또 효소 고정화의 장점을 이해하고 효소를 불용성 담체에 고정화하는 방법과 고정화 효소의 특성을 나타내는 인자들을 결정하는 방법을 학습하는 것이었다. 먼저 미지시료의 농도를 정량분석하기 위해서는 Standard solution의 농도-흡광도 그래프에서 추세선을 이용해 Standard line을 그려야 했는데 이때 Standard solution은 소의 혈청에서 추출하고 가장 일반적으로 사용되는 단백질 표준물질인 BSA를 사용했다. 여기서 BSA는 Tube A~I까지 농도를 다르게 하여 준비했고 Working Reagent (MA:MB:MC(50:48:2, v%)), 즉 WR과는 1대1의 비율로 섞어준 후 60℃에서 60분간 반응시켜 반응이 끝나면 10분간 상온에서 식혀주는 과정을 거쳤다. 이때 WR는 단백질과 결합하여 발색하기 때문에 흡광도를 측정할 수 있게 해주고 1:1의 비율로 섞어주었기 때문에 청색이 진할수록 단백질의 농도가 높다는 것도 추론할 수 있었다. 측정한 흡광도는 예상대로 농도가 높을수록 흡광도가 증가하는 경향을 보고 Tube I를 0으로 기준하여 Standard line을 그려보면 농도-흡광도 그래프의 추세선은 선형으로 비례함을 확인할 수 있었다. 다음으로는 단백질에 버퍼를 섞어 Enzyme solution을 제조하고 이를 TEOS와 함께 Sol-gel 법으로 실리카겔을 만들었다. Sol-gel 법은 실리카겔을 만드는 방법 중의 하나로 TEOS는 물에 의해 가수분해 되어 규산을 생성하고 이때 생산된 규산은 축합반응을 거쳐 실리카겔을 형성하게 된다.

참고 자료

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