결과4 Transformation

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
해당 실험은 형질변환(Transformation)에 의해 재조합된 유전자를 Competent Cell인 BL21에 삽입하여 온도 조절 및 열적 처리를 통한 세포 안정화를 거친 후 LB 배지에서 배양하고, 이를 Selection Mark로 사용되는 Ampicillin이 포함된 고체 배지에서 추가 배양을 통해 형질 변환이 잘 일어난 세포만을 분리하는 실험이다. 실험에서 형질 변환이 잘 일어난 실험군은 형질 전환을 통해, Vector에 Ampicillin에 대한 내성 유전자를 가지고 있지만, 대조군의 경우, Ampicillin에 대한 내성 유전자기 없다. 따라서 이론적으로 Ampicillin가 포함된 고체 배지에서 대조군은 죽게 되고, 실험군은 특정 형상을 보이면서 살아남게 된다. 하지만 본 조의 실험 결과, 대조군과 실험군 모두 형상을 보이지 않고, Ampicillin 고체 배지 내에서 모두 죽은 형태를 보이고 있어, 실험이 결과가 부적합하다는 것을 알 수 있었다. 해당 결과에 대해 영향을 미친 가장 큰 이유는 이전 Restriction of DNA(3번 실험) 결과에 같이 미뤄 볼 때, 이전에 본 조가 제작한 재조합된 유전자 사용에 의한 문제로 보인다.

①Table 2 조성에 맞게 LB를 합성 후, Autoclave 사용 주의 사항을 숙지 후 해당 장치에서 멸균한다. 장치는 미생물이 없어지는 적정 온도와 시간을 설정한다.

②Ampicillin은 고온에 민감한 특성으로 변성이 일어날 수 있으므로, 온도가 이하로 떨어질 때까지 기다린 후 Ampicillin (1000X)을 널어준다. 그 후, 총 2개의 Petridish에 20ml로 덜어 넣고 식혀준다.

③이전에 유전자 재조합한 DNA에 아래의 Table3의 비율로 1.5ml Microtube에 넣어준다.

④얼음에서 10분간 해당 용액을 반응 후 고체 배지로 옮겨 Spreader로 도르게 도말한다.

참고 자료

2020생물화학공학 이론 및 실험노트’
Willey, Sherwood 외 1명, 미생물학 제9판, (주)라이프사이언스, p137~172, p358~371
유주현 외 1명, 응용미생물학실험, 도서출판효일, p211~250
오계헌 외 4명, 최신 미생물학 실험 제 2판, 신광문화사, p210~220