결과2 PCR 5조 PCR(Poltmerase Chain Reaction)

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최초 등록일
2021.02.07
최종 저작일
2019.02
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목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 DNA 중합 효소 연쇄 반응인 PCR(Polymerase Chain Reaction) 기술을 활용하여 이전 1번 실험에서 분리한 Plasmid DNA를 시험관 내에서 대량으로 증폭하는 실험을 목적으로 하고 있다. 해당 PCR을 활용해 대량으로 증폭된 Plasmid DNA는 최종적으로 전기 영동법을 활용하여 각각의 크기 별로 파악할 수 있다. 해당 PCR 기술은 크게 3가지 단계로 구분된다. 첫 번째 과정은
DNA polymerase의 이중 가닥은 단일 가닥으로 분리해주는 Denaturation(DNA변성)하는 단계, 두 번째는 단일 가닥으로 한 가닥의 주형 DNA 가닥에 Primer이 부착되는 과정인 Primer Annealing 단계, 마지막으로 dNTPs와 DNA polymerase를 첨가하고, 단일 주형 DNA에 부착된 Prime이 연장 및 중합 과정을 하는 과정으로 최종적으로 목적 DNA의 증폭 및 복제를 일으키는 Extension 단계로 구성된다. 증폭 효율은 실험 과정에서 반응 온도와 Cycle 수에 의존한다.
본 조 실험 결과, 전기영동을 통한 결과를 아예 확인 불가였고, 모든 조가 비슷한 상황이었다. 이론적인 전기영동 결과는 (377-25)bp인, 0.352kbp의 값을 가져야 된다. 오차의 가장 큰 원인은 T7 terminator primer 미량 투입 과정에서 발생한 실험 오차와 미리 재조합된 eGFP, Another gene으로 보인다.

⑷Electrophoresis apparatus
본 실험에서는 PCR Matrix를 통해 순차적으로 제조된 시약을 PCR Cycle 과정을 거친다. 해당 시약을 Agarose gel Matrix 기반의 해당 장치를 활용하여 DNA의 크기 및 구조 등을 파악한다. 사용 방법은 간단하기 DNA가 포함된 시약을 –전극에 주입 후, 반대편에 +전하를 걸어 DAN가 길이 별로 이동하게 만들어준다.

참고 자료

2020 생물화학공학 이론 및 실험노트’
2020 화요일 생물화학공학 2조 PCR ppt
유민, 김병오, 이혜영, ‘미생물 실험서’, p68~75
Willey, Sherwood, Woolverton, ‘미생물학 제9판’, (주)라이프사이언스, p137~172, p291~423
한국 미생물학회 이건형, ‘Benson's 미생물학실험’, p411-413
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