Transformation 결과레포트 [A+]
- 최초 등록일
- 2020.10.10
- 최종 저작일
- 2020.05
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소개글
"Transformation 결과레포트"에 대한 내용입니다.
목차
1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference
본문내용
1. Abstract
본 실험은 형질전환으로, recombinant plasmid DNA를 균주(박테리아, BL21)에 넣어 형질전환을 확인하는 실험이다. 재조합된 eGFP DNA를 처리된 competent cell(수용성 세포)에 넣으면 colony가 생성된다. 그를 통해 형질전환 결과를 확인한다. 형질전환이 완료된 세포의 경우, ampicillin에 대한 저항 유전자를 가지고 대조군의 경우 그렇지 않으므로 두 가지를 비교하여 형질전환이 성공된 배지의 colony를 확인하고, 형질전환 결과를 판단할 수 있다. 세포의 배양은 UV를 가해 확인가능한데, 재조합 plasmid DNA에 eGFP, 녹색형광물질을 넣어주었기 때문이다.
2. Experiment
(1) 기구 및 시약
1.5ml microtube
Micropipette
Incubator
Autoclave
(고압 증기 멸균기)
Clean bench
(무균작업대)
Petri dish
표 1. 실험 기구
시약)
1. BL21 (E.coli competent cell)
→ BL21는 발현숙주로서, T7 promoter를 이용하여 단백질을 만든다. 보관은 -80℃에서 해야 한다. 만약, 보관이 제대로 이루어지지 않아서 서서히 녹게 된다면, 형질전환의 효율이 낮아지게 된다. -80℃에서 보관되는 만큼, competent cell을 분주하는 데에도 절차가 필요하다. 5분 내에 시행되어야하며, 10-20초간 water bath에서 1/3가량 녹인 후, 10-20초 얼음에서 완전히 녹인다. 녹은 용액을 얼음에서 분주하고, 다시 -80℃에서 보관하는 것이 그 절차이다. competent cell(수용성 세포)이란 유전자 도입을 할 때, DNA 삽입이 쉽게 가능하도록 처리된 세포로서, 이를 얼음에서 녹인 후 형질전환이 즉시 수행되어야 한다. 형질전환이 효과적으로 수행되기 위해, 균주에 물리적 혹은 화학적 처리를 하여 DNA 삽입이 정상적으로 이루어지도록 해야 한다. 이때, BL21은 pET-22b(+)의 vector를 대량생산하기 위하여 일반적으로 사용되는 competent cell이다.
참고 자료
04_HIT+competent+cell+protocol
항생물질학, 베타락탐계 항생물질, 한동대학교
Protocols, Pouring LB Agar Plates, addgene