단백질 정량 분석 결과레포트

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2020.09.27
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2019.10
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목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

1. Abstract

Lowry법을 비롯한 여러 가지의 단백질 정량 분석법을 알아보았고 그 중 가장 정밀도 높은 방법인 Lowry법으로 단백질을 정량 분석하였다. 먼저 BSA 검량 곡선을 그리고, 이를 이용해 미지 농도의 단백질 용액의 흡광도를 측정하여 농도를 구해보는 실험을 진행하였다.

우선 200µg/ml의 BSA 원액을 희석하여 0, 50, 100, 150, 200µg/ml의 여러 농도로 샘플을 제조하고, 각각의 샘플 200µl에 Lowry reagent를 1ml씩 주입하였다. 각 용액들은 pipetting하여 잘 섞이도록 해주고 20분간 상온에서 반응시켰다. 이후 Folin&Ciocalteu's Phenol reagent를 100µl씩 주입하여 pipetting하고 30분간 반응시키며 색 변화를 관찰하였다. 색이 변하면 200µg/ml의 단백질 용액의 흡광도를 여러 파장대에서 측정하여 최적의 파장대를 설정한다. 실험을 통해 설정한 최적의 파장대는 750nm이다. 최적의 파장대로 다른 농도의 단백질 샘플의 흡광도 역시 측정한다. 이때 표준편차를 구하기 위해 흡광도는 3번씩 반복측정한다. BSA 샘플의 농도와 흡광도를 이용해 검량 곡선을 구한다.

설정한 최적의 파장대로 미지 단백질 용액의 흡광도를 측정한다. 흡광도를 측정하기 전에 BSA 샘플과 동일하게 Lowry reagent와 Folin&Ciocalteu's Phenol reagent를 넣어 반응시켜준다. 미지 단백질의 흡광도를 측정하고 이 값으로 단백질 용액의 농도를 구하기 위해 앞서 구한 BSA 검량 곡선의 추세선 수식에 흡광도 값을 대입한다. 측정한 흡광도 값은 0.197A 이며, 이 값을 수식에 대입하여 구한 미지 단백질 용액의 농도는 76.8µg/ml 이다.

실험 결과, BSA 검량 곡선은 값이 0.9745로 나와 실험이 잘 진행된 것으로 보였으며 미지 단백질 용액의 농도와 색을 비교하였을 때도 예측 가능한 범위 내에 있었다. 그러나 검량 곡선이 완벽한 선형으로 얻어지진 못했으며 이 원인으로는 피펫팅으로 인한 거품 발생, 고르지 않은 단백질 용액, 높은 온도로 인한 단백질의 변성 등을 생각해볼 수 있었다.

참고 자료

안전보건공단 화학물질정보, www.msds.kosha.or.kr
사이언스올, https://www.scienceall.com
“2019 2학기 화공기초이론및실험2 실험노트”
김해신, 2014, “생화학 실험서 제2판”, 월드사이언스, p.45~48
조봉희 외2명, “UV-분광광도법과 전기영동에 의한 피마자 유식물에서 저온처리에 의한 당류 함량과 단백질 구성의 분석”, 분석화학, p.3~4, (1995)
안소연, "BSA 분리에 대한 정밀 여과막 오염 특성", 서울과학기술대 학위논문, p.41~42 (2006)
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