결과5_Liquid_culture A+ 결과레포트

최초 등록일
2020.07.06
최종 저작일
2020.06
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목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract

이번 실험은 eGFP DNA를 포함하고 있는 유전자가 포함된 세포를 액체 배지에 배양하고 IPTG를 첨가하여 특정 유전자를 발현시켜 그것을 확인해보는 실험이었다. eGFP DNA를 포함한 배지를 shaking incubator에서 37℃로 배양한 후 세포의 수가 급격하게 증가하는 시기인 대수기에 IPTG를 넣어주었고 이 때의 O.D값이 0.6~0.8이다. IPTG를 넣어준 후에 세포 성장에 최적화된 온도인 25℃에서 shaking incubator에서 induction 해주었다. 그 후에 UV transilluminator를 이용하여 대조군(eGFP를 포함x)과 비교해보았을 때 모든 조에서 각각 eGFP DNA를 포함하고 있기 때문에 녹색 형광빛을 나타냈음을 확인하였다.

2. Experiment

(1) 아래 Table 1의 조성으로 LB배지를 2개를 만든 후 Autoclave로 멸균한다.

주의 사항 : Autoclave는 고온, 고압에서 다루므로 주의하여 사용해야한다. 마친 후 압력이 떨어지기 전까지 뚜껑을 열지 않아야하고 Autoclave를 사용하여 멸균할 액체는 액체의 부피보다 큰 용기를 사용하여 멸균해야한다. 또한 Autoclave 중 액체가 넘쳐 흘렀다면 반드시 내부를 꼭 세척해야한다. Auto의 수증기 발생을 위한 물은 꼭 증류수를 사용하도록 한다.

100ml 기준
Tryptone
1g
Yeast Extract
0.5g
NaCl
1g
Table 1. LB배지 조성

(2) Clean-bench에서 60℃ 이하의 온도에서 Ampicillin (1000×)을 각각 50μl씩 넣는다.

주의 사항 : Ampicillin은 온도에 민감한 β-Lactam 고리를 가지고 있어 온도에 민감한 물질이다. 따라서 60℃ 이하에서 실험을 진행해야한다. 온도가 너무 높으면 Ampicillin이 변성되어 활성이 떨어지고, 너무 낮으면 Plate를 제조할 때 배지가 굳을 가능성이 있기 때문에 적당한 온도인 60℃에서 실험을 진행해야한다.℃

참고 자료

Liquid culture & expression 예비 레포트(강예찬)
http://webbuild.knu.ac.kr / 미생물학 pdf 파일
환경미생물학, 동화기술교역, 2004, Raina M. Maier 외 2명, p45~50
https://www.msu.ac.kr / 5장 세균의 영양과 대사 pdf 파일

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